葡萄糖醛酸同位素标记实验

检测项目

同位素标记葡萄糖醛酸：检测经13C或2H等稳定同位素标记的葡萄糖醛酸分子本身，作为代谢追踪的起点。

葡萄糖醛酸化代谢产物：检测目标化合物（如药物、毒素、激素）与标记葡萄糖醛酸结合后形成的共价结合物。

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸：检测关键的活化中间体UDP-葡萄糖醛酸的标记水平和浓度变化。

内源性葡萄糖醛酸池大小：通过同位素稀释法，定量测定生物体内未标记的葡萄糖醛酸总量。

葡萄糖醛酸合成速率：基于标记前体的掺入速度，计算内源性葡萄糖醛酸从头合成的动力学参数。

药物-葡萄糖醛酸苷：特异性检测并定量药物分子经葡萄糖醛酸化后生成的主要及次要代谢产物。

胆红素葡萄糖醛酸苷：监测胆红素代谢过程中，标记葡萄糖醛酸参与形成的结合型胆红素。

类固醇激素葡萄糖醛酸苷：分析性激素等类固醇激素的葡萄糖醛酸化代谢产物及其标记比例。

外源物解毒产物：检测环境毒素或致癌物经葡萄糖醛酸化解毒后生成的标记代谢物。

同位素丰度与标记效率：精确计算样品中标记原子相对于未标记原子的百分比，评估标记实验的效率。

检测范围

生物体液：包括血浆、血清、尿液、胆汁、脑脊液等，用于检测游离或结合的标记代谢物。

组织分浆：如肝脏、肾脏、肠道等代谢活跃器官，分析组织特异性葡萄糖醛酸化活性。

细胞培养上清与裂解液：应用于原代肝细胞、肝微粒体或重组酶系等体外代谢模型。

体外孵育体系：包含肝微粒体、S9组分或重组UGT酶与标记底物的反应体系。

药物发现与开发：用于候选药物的代谢稳定性、代谢途径鉴定及药物-药物相互作用评估。

疾病代谢组学：研究肝脏疾病、代谢紊乱等病理状态下葡萄糖醛酸化通路的变化。

环境毒理学：评估环境污染物在生物体内的解毒代谢途径与动力学。

天然产物代谢：研究植物化学物、保健品等天然产物的体内代谢命运。

酶动力学研究：测定不同UDP-葡萄糖醛酸转移酶同工酶的动力学参数（如Km， Vmax）。

代谢通量分析：整合标记数据，定量描绘整个葡萄糖醛酸代谢网络的通量分布。

检测方法

液相色谱-质谱联用：核心分析方法，利用LC分离，MS或MS/MS对标记与非标记代谢物进行高灵敏度、高特异性定性与定量。

稳定同位素稀释法：向样品中加入已知量的同位素标记内标，实现目标代谢物的绝对定量，校正基质效应。

高分辨质谱：使用Orbitrap或TOF等高分辨质谱精确测定代谢物分子量，区分同位素质量差异，鉴定未知代谢物。

多反应监测：在串联质谱上设置特定的母离子-子离子对，实现对目标标记代谢物的高选择性、高灵敏度靶向定量。

放射性同位素示踪：使用14C标记的前体，通过液体闪烁计数或放射自显影进行半定量追踪，常作为稳定同位素方法的补充。

核磁共振波谱：利用13C-NMR直接观测标记原子在代谢产物中的位置和富集情况，提供结构信息。

酶解与衍生化：使用β-葡萄糖醛酸酶水解结合物，或对样品进行化学衍生化，以提高检测灵敏度或分离效果。

固相萃取与微萃取：用于复杂生物样品的前处理，富集目标代谢物，去除干扰杂质。

代谢物谱分析：非靶向或靶向地全面分析样品中所有可能的标记与非标记葡萄糖醛酸化相关代谢物。

动力学建模计算：基于时间序列的标记数据，通过房室模型或通量分析模型计算代谢速率常数。

检测仪器设备

三重四极杆质谱仪：进行MRM定量分析的主力设备，具有优异的灵敏度和定量线性范围。

高分辨液相色谱-质谱联用仪：如Q-TOF或Orbitrap系列，用于非靶向代谢物筛查、精确质量测定和结构解析。

超高效液相色谱仪：提供快速、高分离度的色谱分离，缩短分析时间，提高峰容量。

液相色谱自动进样器：实现样品的高通量、连续、精准进样，保证分析重现性。

固相萃取装置：用于生物样品中代谢物的自动化或手动萃取、净化和浓缩。

氮吹浓缩仪：用于温和地蒸发萃取后样品中的有机溶剂，浓缩目标分析物。

涡旋混合器与离心机：用于样品制备过程中的混合、沉淀蛋白和相分离。

β-葡萄糖醛酸酶解孵育箱：提供恒温环境，用于酶解葡萄糖醛酸结合物。

液体闪烁计数器：若使用放射性同位素标记，用于检测样品中的放射性强度。

核磁共振波谱仪：主要用于13C标记实验，提供原子水平的代谢途径和动力学信息。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。