细胞增殖抑制率MTT法检测

检测项目

细胞毒性评估：评估待测药物或化合物对特定细胞系的直接杀伤或生长抑制能力。

抗肿瘤药物筛选：高通量筛选具有潜在抗肿瘤活性的候选化合物或天然提取物。

半数抑制浓度测定：计算抑制50%细胞增殖所需的药物浓度，即IC50值，用于量化药效。

药物作用时效关系：检测不同药物作用时间对细胞增殖抑制率的影响。

药物剂量效应关系：检测不同药物浓度梯度下的细胞增殖抑制情况，绘制量效曲线。

联合用药效应分析：评估两种或多种药物联合使用时对细胞增殖的协同、相加或拮抗作用。

生物材料相容性测试：评估医用生物材料浸提液或材料表面对细胞生长的影响。

辐射或物理因素效应：检测不同剂量辐射或其他物理处理对细胞增殖能力的抑制作用。

基因功能研究：通过过表达或敲低特定基因，研究该基因对细胞增殖表型的影响。

血清或生长因子依赖性：检测细胞在不同血清浓度或生长因子条件下的增殖反应。

检测范围

肿瘤细胞系：适用于各类贴壁或悬浮生长的人源及鼠源肿瘤细胞，如HeLa、A549、HepG2等。

原代培养细胞：可用于从组织分离的原代细胞，如成纤维细胞、肝细胞、免疫细胞等。

永生化细胞系：适用于经过病毒或基因转染获得永生化特性的正常细胞系。

干细胞研究：用于评估诱导多能干细胞或成体干细胞的增殖活性及分化过程中的增殖变化。

药物研发与药理学：广泛应用于新药临床前研究的体外药效学评价阶段。

中药现代化研究：用于筛选和验证中药单体、复方或提取物的体外抗肿瘤活性。

纳米医学与毒理学：评估纳米药物载体的疗效或纳米材料本身对细胞的毒性效应。

环境污染物检测：用于检测重金属、有机污染物等环境毒物对细胞的增殖毒性。

功能性食品与化妆品：评估功能因子或化妆品原料的安全性与细胞活性影响。

基础细胞生物学研究：用于研究细胞周期、凋亡、衰老等生命活动与增殖相关的机制。

检测方法

细胞接种与培养：将对数生长期的细胞消化计数，以适当密度接种于96孔板，培养过夜使细胞贴壁。

药物干预处理：吸弃旧培养基，加入含不同浓度梯度待测药物的新鲜培养基，设立空白对照组和阴性对照组。

MTT溶液配制与添加：将MTT粉末溶于PBS配成工作液，干预结束后每孔加入适量MTT溶液，继续孵育。

甲瓒结晶形成：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将黄色MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲瓒结晶。

终止反应与溶解结晶：小心吸弃孔内上清液，加入二甲基亚砜等有机溶剂，充分振荡溶解甲瓒结晶。

吸光度值测定：使用酶标仪在490nm或570nm波长处测定各孔的吸光度值。

数据计算与分析：计算各实验组的平均OD值，根据公式（1-实验组OD/对照组OD）×100%计算抑制率。

绘制量效曲线：以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，绘制剂量-效应曲线。

计算IC50值：利用GraphPad Prism等软件，通过非线性回归拟合曲线，计算出IC50值。

统计学处理：实验通常重复3次以上，数据以均值±标准差表示，采用t检验或方差分析进行组间比较。

检测仪器设备

二氧化碳培养箱：为细胞提供恒定的温度、湿度和CO2浓度环境，确保细胞正常生长。

生物安全柜/超净工作台：提供无菌操作环境，防止细胞污染并保护操作人员安全。

倒置显微镜：用于观察细胞形态、贴壁状况、密度及污染情况。

细胞计数仪/血球计数板：用于精确计数细胞悬液浓度，确保接种密度一致。

微量移液器：用于精确移取微升级别的培养基、药物及试剂。

多通道移液器：用于96孔板或384孔板的高通量加样，提高操作效率和均一性。

酶标仪：核心检测设备，用于读取96孔板各孔在特定波长下的吸光度值。

恒温水浴锅：用于预热培养基、胰酶等细胞培养用液。

低速离心机：用于细胞传代前的沉淀收集。

涡旋振荡器与平板振荡器：用于充分混匀试剂或溶解甲瓒结晶，确保颜色均一。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。