鼠李糖乳杆菌降胆固醇实验

检测项目

菌株体外胆固醇去除率：测定鼠李糖乳杆菌在含胆固醇培养基中培养后，上清液中胆固醇的减少量，评估其直接吸附或同化能力。

菌体细胞壁胆固醇吸附量：分离菌体细胞壁成分，定量分析其结合胆固醇的具体含量，探究主要吸附位点。

胆盐水解酶活性：检测菌株产生的胆盐水解酶活力，该酶能将结合胆盐水解为游离胆酸，促进其与胆固醇共沉淀排出。

发酵上清液对胆固醇胶束溶解度的影响：评估细菌发酵产物对模拟肠道内胆固醇胶束的破坏能力，间接反映其抑制胆固醇吸收的潜力。

实验动物血清总胆固醇：在高胆固醇模型动物实验中，定期采集血液，检测血清中总胆固醇的含量变化。

实验动物血清低密度脂蛋白胆固醇：检测血清中“坏胆固醇”的水平，是评价降胆固醇效果的关键动脉粥样硬化风险指标。

实验动物血清高密度脂蛋白胆固醇：检测血清中“好胆固醇”的水平，评估其对脂质代谢的良性调节作用。

实验动物肝脏总胆固醇：处死动物后取肝脏组织匀浆，测定肝脏内胆固醇蓄积量，反映胆固醇的整体代谢状况。

粪便中总固醇及胆汁酸排泄量：收集动物粪便，检测其中中性固醇（胆固醇代谢物）和酸性固醇（胆汁酸）的含量，评估胆固醇的排出途径。

肝脏胆固醇代谢关键基因表达：采用分子生物学技术检测肝脏中HMG-CoA还原酶、LDL受体、CYP7A1等基因的mRNA表达水平，从机理层面解释作用。

检测范围

体外发酵体系：包含人工胃液、肠液耐受性试验，以及在MRS-Cholesterol培养基中的胆固醇去除培养体系。

细胞壁及胞内组分：涵盖完整的菌体、经过处理的细胞壁碎片、胞内提取物以及无细胞发酵上清液等不同组分。

模拟胃肠道环境：在体外模拟胃肠道的pH值、胆盐浓度及消化酶环境，评估菌株在复杂条件下的功能稳定性。

高脂血症动物模型血清：通常使用高脂饮食诱导的小鼠、大鼠或仓鼠模型，定期采集的血清样本。

动物肝脏组织匀浆：实验结束后处死动物，取完整肝脏组织制备成的匀浆液，用于脂质提取与分析。

动物粪便样本：在实验特定周期内收集的动物新鲜或冻干粪便，用于固醇和胆汁酸的定量分析。

肠道内容物：采集动物不同肠段（如回肠、盲肠、结肠）的内容物，分析其中菌群、胆汁酸及胆固醇代谢产物的变化。

肝脏组织RNA样本：从动物肝脏组织中提取的高质量总RNA，用于后续实时荧光定量PCR分析。

细菌培养上清与菌泥：鼠李糖乳杆菌在控制条件下培养后，通过离心分离得到的上清液和菌体沉淀。

商业胆固醇与胆盐试剂：实验所用的标准品，如胆固醇粉末、牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠等化学试剂。

检测方法

邻苯二甲醛法：用于快速测定体外培养液中或血清中总胆固醇含量，基于胆固醇与邻苯二甲醛的显色反应。

高效液相色谱法：精确分离并定量检测血清、肝脏或粪便中的各种胆固醇酯、游离胆固醇及胆汁酸种类。

酶比色法（试剂盒法）：采用商品化试剂盒，通过胆固醇氧化酶-过氧化物酶反应体系，自动化检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C。

胆盐水解酶活性测定法：以牛磺胆酸钠或甘氨胆酸钠为底物，通过检测水解产物（游离胆酸）或剩余底物来量化酶活。

胆固醇胶束制备与测定法：在体外模拟肠道环境制备含胆固醇的胶束溶液，通过离心过滤测定加入菌体或上清液后胶束中胆固醇的残留量。

索氏提取法：用于从动物肝脏组织或粪便样本中定量提取总脂质，为后续胆固醇测定做准备。

气相色谱-质谱联用法：用于高灵敏度、高特异性地定性和定量分析粪便中的中性固醇和胆汁酸代谢谱。

实时荧光定量PCR法：从动物肝脏组织提取RNA后，反转录为cDNA，通过SYBR Green或TaqMan探针法检测胆固醇代谢相关基因的表达量。

菌体吸附量间接计算法：通过测定培养基中初始胆固醇含量与培养后上清中胆固醇含量的差值，减去菌体裂解释放的胆固醇，计算吸附量。

组织病理学染色法：取动物肝脏组织制作石蜡切片，进行油红O或苏木素-伊红染色，在显微镜下观察肝脏脂滴沉积情况。

检测仪器设备

紫外-可见分光光度计：用于执行邻苯二甲醛法、酶比色法等基于吸光度读数的胆固醇定量分析。

高效液相色谱仪：配备紫外或蒸发光散射检测器，用于复杂生物样本中脂质分子的精确分离与定量。

全自动生化分析仪：可批量、快速、准确地检测大量血清样本中的TC、TG、HDL-C、LDL-C等血脂指标。

气相色谱-质谱联用仪：用于对粪便中的固醇和胆汁酸等小分子代谢物进行高精度的定性与定量分析。

实时荧光定量PCR仪：用于检测肝脏组织中胆固醇合成、转化与运输相关基因的mRNA表达水平。

高速冷冻离心机：用于分离菌体与培养上清、分离血清、制备组织匀浆等样本前处理步骤。

恒温培养振荡器：为鼠李糖乳杆菌的扩大培养及体外胆固醇去除实验提供恒温、通气的培养环境。

厌氧培养箱：为严格厌氧或兼性厌氧的益生菌提供无氧或低氧的培养环境，确保其正常生长代谢。

分析天平：用于精确称量化学试剂、动物饲料、组织样本及粪便样本。

组织匀浆机：用于将动物肝脏、肠道等组织快速、均匀地破碎，制备成可用于提取和分析的匀浆液。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。