鼠李糖乳杆菌肠道定植分析

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2026-04-03  

本检测系统阐述了鼠李糖乳杆菌肠道定植分析的关键技术体系。文章围绕检测项目、检测范围、检测方法与检测仪器设备四个核心板块展开,详细介绍了从目标菌株特异性鉴定、定量追踪到定植稳定性与功能效应评估的全流程分析方案。内容涵盖分子生物学、微生物学及生物信息学等多种技术手段,旨在为评估鼠李糖乳杆菌在复杂肠道环境中的存活、定植与益生功效提供一套标准化、多维度的研究框架与实操指南。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

目标菌株特异性基因检测:通过PCR或qPCR技术,特异性扩增鼠李糖乳杆菌的独有基因序列(如看家基因或功能基因),以确认其身份。

绝对定量分析:利用qPCR标准曲线或数字PCR技术,对粪便或肠道内容物中鼠李糖乳杆菌的绝对拷贝数或活菌数进行精确定量。

相对丰度分析:通过16S rRNA基因高通量测序,分析鼠李糖乳杆菌在整体肠道菌群中所占的比例及其变化。

定植持续性监测:在停止摄入益生菌后的不同时间点,持续检测目标菌株的数量,评估其在肠道内的存留时间。

活菌与死菌鉴别:采用叠氮溴化丙锭(PMA)或碘化丙啶(PI)等染料预处理结合qPCR,选择性检测具有完整细胞膜的活菌。

菌株水平分型鉴定:应用多位点序列分型(MLST)或全基因组测序(WGS),在菌株水平上确认定植菌与摄入菌的一致性。

代谢活性评估:检测与鼠李糖乳杆菌相关的特异性代谢产物(如短链脂肪酸、细菌素),间接反映其定植后的功能活性。

肠道屏障功能相关指标:分析定植后肠道紧密连接蛋白表达、黏液层厚度等,评估益生菌对宿主屏障的潜在影响。

免疫调节效应分析:检测定植前后宿主肠道或全身性免疫标志物(如细胞因子、免疫球蛋白)的变化。

竞争性排除能力测试:评估鼠李糖乳杆菌对特定病原菌(如大肠杆菌、沙门氏菌)定植的抑制能力。

检测范围

人类志愿者粪便样本:采集益生菌干预前后及随访期的粪便,是评估人体内定植情况的主要样本来源。

动物模型肠道内容物:采集无菌鼠、SPF鼠等动物模型不同肠段(回肠、结肠、盲肠)的内容物进行定植分析。

肠道黏膜附着菌群:通过冲洗、刮取等方式获取紧密附着在肠道黏膜上的细菌,研究其定植的生态位。

体外肠道模型系统:利用SHIME、TIM等模拟人体胃肠道的体外模型,研究其在模拟环境中的定植动力学。

益生菌制剂成品:对摄入的胶囊、粉剂、酸奶等产品中的鼠李糖乳杆菌进行活菌计数和菌株验证,作为定植分析的输入基准。

血液与组织样本:极少数情况下,检测血液或肠系膜淋巴结中是否存在易位的细菌,评估安全性。

口腔及上消化道样本:研究益生菌在经口摄入后,在胃、十二指肠等上消化道的存活情况。

环境对照样本:采集受试者生活环境样本,排除环境菌株污染对定植分析结果的干扰。

不同人群队列样本:覆盖健康成人、老年人、婴幼儿、患者等不同人群,研究宿主因素对定植的影响。

长期随访样本库:建立样本库,用于进行数月甚至数年的长期定植稳定性回顾性研究。

检测方法

实时荧光定量PCR(qPCR):基于特异性引物和探针,对目标菌株DNA进行快速、高灵敏度的绝对或相对定量。

数字PCR(dPCR):将样本分割成数万个微反应单元进行PCR,无需标准曲线即可实现绝对定量,精度更高。

16S rRNA基因扩增子测序:通过对细菌16S rRNA基因可变区进行高通量测序,分析肠道菌群整体结构和目标菌属的相对丰度。

宏基因组测序(Shotgun Metagenomics):对样本中全部微生物DNA进行鸟枪法测序,可在种乃至菌株水平进行更精确的物种鉴定和功能分析。

变性梯度凝胶电泳/温度梯度凝胶电泳(DGGE/TGGE):基于DNA片段解链行为不同的分离技术,用于快速比较不同样本中优势菌群的差异。

活菌平板计数法:使用选择性或半选择性培养基进行培养计数,是评估可培养活菌数的经典方法,但可能低估不可培养菌。

荧光原位杂交(FISH):利用荧光标记的特异性寡核苷酸探针与细胞内靶标RNA结合,在显微镜下直观观察和定位目标细菌。

流式细胞术结合细胞分选:利用特异性抗体或荧光探针标记目标细菌,通过流式细胞仪进行快速计数或分选。

代谢组学分析:采用气相/液相色谱-质谱联用技术,全面分析肠道内容物中代谢产物的变化,反映定植菌的功能输出。

全基因组测序与生物信息学分析:对分离出的定植菌进行全基因组测序,通过SNP分析、基因组比对等确认菌株来源,并挖掘其定植相关基因。

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪:执行qPCR检测的核心设备,用于目标基因的扩增与实时荧光信号采集。

数字PCR系统:用于进行超高精度的绝对定量分析,特别是对低丰度样本的检测。

高通量测序仪:如Illumina NovaSeq、MiSeq等平台,用于进行16S rRNA基因测序和宏基因组测序。

厌氧培养工作站:提供严格的厌氧环境,用于对严格厌氧或兼性厌氧的肠道微生物进行培养和操作。

生物显微镜与荧光显微镜:用于观察细菌形态、进行FISH实验的成像和结果判读。

流式细胞仪:用于快速对荧光标记的细菌细胞进行计数、分析和分选。

气相色谱-质谱联用仪:用于短链脂肪酸等挥发性代谢产物的定性与定量分析。

液相色谱-质谱联用仪:用于非挥发性代谢产物(如胆汁酸、氨基酸等)的高通量、高灵敏度检测。

全自动微生物鉴定系统:基于生化反应或质谱技术,对分离出的菌落进行快速菌种鉴定。

超低温冰箱:用于长期保存各类生物样本(粪便、DNA、菌株等),确保样本稳定性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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