离子交换层析分离

检测项目

目标蛋白纯度：评估经离子交换层析分离后，目标蛋白质在样品中的相对含量，是衡量纯化效果的核心指标。

总蛋白浓度：测定样品中所有蛋白质的总量，用于计算回收率和纯化倍数。

离子强度（电导率）：监测洗脱缓冲液的盐浓度（通常为NaCl），是控制目标物洗脱的关键参数。

pH值：精确测定缓冲体系的pH值，因其直接影响蛋白质的净电荷和与交换介质的结合能力。

核酸残留量：检测纯化后的蛋白质样品中是否残留DNA或RNA，是药物级蛋白纯化的重要质控项目。

内毒素水平：对于医用蛋白，需严格检测由革兰氏阴性菌产生的内毒素是否被有效去除。

宿主细胞蛋白残留：评估来自表达系统（如大肠杆菌、CHO细胞）的杂蛋白去除程度。

生物活性：测定目标蛋白在纯化后是否保持了其特定的生物学功能。

样品均一性：通过电泳等方法检测目标蛋白的分子量均一性，判断是否发生降解或聚集。

流速与柱压：监测层析过程中的线性流速和柱床压力，确保操作在介质承受范围内并保持分离效率。

检测范围

重组治疗性蛋白：如单克隆抗体、胰岛素、生长因子等，离子交换是下游纯化工艺中的关键步骤。

疫苗抗原：用于纯化病毒样颗粒、重组蛋白亚单位疫苗等，去除宿主杂质。

血浆蛋白制品：如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子的分离与纯化。

酶制剂：从微生物或动植物提取液中纯化各种工业用或诊断用酶。

核酸（DNA/RNA）：利用离子交换层析纯化质粒DNA、基因组DNA或mRNA。

多肽与激素：分离合成或天然来源的带电多肽，如降钙素、胰高血糖素等。

抗生素：纯化某些具有离子化基团的抗生素，如氨基糖苷类。

病毒载体：在基因治疗中，用于腺相关病毒、慢病毒等载体的纯化。

天然产物提取：从植物或微生物发酵液中分离生物碱、有机酸等带电小分子。

工业用水处理：检测经过离子交换树脂处理后的水质，如去离子水的电阻率。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分析蛋白质纯度、分子量及鉴定宿主蛋白残留的经典方法。

高效液相色谱法：尤其是离子交换HPLC，可用于高分辨率地分析蛋白质电荷异质体。

紫外-可见分光光度法：通过280nm（蛋白质）或260nm（核酸）吸光度快速测定浓度。

酶联免疫吸附测定：高灵敏度地定量检测特定的宿主细胞蛋白或杂质。

鲎试剂法：用于定量检测样品中的内毒素含量。

毛细管电泳法：提供高分辨率的电荷异质性分析，适用于单抗等复杂蛋白。

电导率检测法：在线或离线监测缓冲液的离子强度，指导梯度洗脱。

pH计测量法：使用精密pH计准确标定和监测所有缓冲溶液的pH值。

生物活性测定法：根据蛋白功能设计细胞实验、酶促反应等，评估活性回收率。

动态光散射法：检测蛋白质样品的聚集状态和流体力学半径。

检测仪器设备

AKTA蛋白纯化系统：全自动层析系统，可精确控制梯度、流速、pH和电导，实现过程自动化。

高效液相色谱仪：配备离子交换柱和紫外检测器，用于分析和微量制备。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定蛋白质和核酸的浓度。

电泳系统：包括凝胶成像系统，用于SDS-PAGE、等电聚焦等分析。

pH计：高精度仪器，用于缓冲液配制和样品pH值测定。

电导率仪：用于测量溶液离子强度，校准层析系统的在线电导探头。

酶标仪：用于执行ELISA、蛋白定量等微孔板检测。

毛细管电泳仪：用于高分辨率电荷异质性分析和纯度鉴定。

生物反应器/发酵罐：用于生产含有目标产物的初始培养物或发酵液。

超纯水系统：制备低离子含量、低有机物的超纯水，用于配制所有缓冲液和溶液。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。