细胞侵袭潜能流式细胞仪测试

检测项目

侵袭性细胞亚群比例：通过特定标记物识别并量化具有高侵袭潜能的细胞在总细胞群体中所占的百分比。

细胞表面整合素表达水平：检测如整合素αVβ3、β1等的表达强度，这些分子与细胞粘附和迁移能力密切相关。

基质金属蛋白酶活性：利用荧光底物评估细胞分泌的MMP-2、MMP-9等蛋白酶的活性，反映其降解细胞外基质的能力。

上皮-间质转化标记物：分析E-cadherin（下调）、N-cadherin（上调）及Vimentin等EMT相关蛋白的表达变化。

细胞伪足形成能力：通过特异性荧光染色，评估细胞形成侵袭性伪足（如丝状伪足、片状伪足）的倾向。

细胞迁移相关信号通路活性：检测如FAK、Src、Rho GTPases等信号通路关键蛋白的磷酸化状态或活化水平。

细胞外囊泡的释放与摄取：分析肿瘤细胞释放的微囊泡或外泌体及其对受体细胞侵袭表型的影响。

细胞周期与侵袭关联性：探究处于不同细胞周期时相的细胞其侵袭相关分子表达的差异。

细胞凋亡抵抗能力：评估高侵袭潜能细胞在失巢等应激条件下的凋亡率，通常与侵袭性正相关。

干细胞样特性标记：检测如CD44、CD133等肿瘤干细胞标记物的表达，这类细胞通常具有更强的侵袭和转移能力。

检测范围

各类肿瘤细胞系：适用于乳腺癌、肺癌、结直肠癌、肝癌、胶质瘤等多种人类或动物来源的肿瘤细胞系。

原代肿瘤细胞：从患者肿瘤组织新鲜分离培养的原代细胞，评估其个体化的侵袭潜能。

经基因编辑的细胞模型：对特定基因进行过表达、敲低或敲除后，评估该基因对细胞侵袭能力的影响。

药物或化合物处理细胞：用于筛选能够抑制或促进细胞侵袭的候选药物、天然产物或化学小分子。

肿瘤干细胞分选群体：对通过流式分选或磁珠分选获得的肿瘤干细胞亚群进行功能验证。

不同转移潜能细胞亚群：比较同一肿瘤来源但转移能力不同的细胞亚系（如高转移 vs. 低转移）的分子特征。

肿瘤相关免疫细胞：评估肿瘤微环境中巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞的侵袭/迁移表型。

内皮细胞与成纤维细胞：研究在肿瘤微环境影响下，这些基质细胞的侵袭性行为变化。

三维培养或球体细胞：对在三维基质胶或悬滴中形成的细胞球体进行消化和分析，模拟体内状态。

循环肿瘤细胞模拟：对经过血液模拟流体剪切力处理的细胞进行分析，模拟CTC的侵袭特性。

检测方法

Transwell侵袭实验后流式分析：将完成Transwell小室侵袭的细胞消化收集，用流式细胞仪进行精确计数和表型分析。

荧光标记基底膜基质侵袭法：使用荧光染料预标记的基质胶，通过检测穿过基质的细胞荧光强度来定量侵袭。

细胞内抗原染色法：对细胞进行固定破膜后，对EMT标记物、信号分子等细胞内抗原进行荧光抗体染色。

细胞表面抗原直接染色法：对活细胞或轻微固定的细胞进行表面标记物（如整合素）的荧光抗体染色。

活性荧光底物孵育法：将细胞与MMP等酶的荧光底物共孵育，通过检测细胞内的荧光信号强度反映酶活性。

pHrodo™ 标记基质胶吞噬分析：利用pH敏感荧光染料标记的基质胶，通过细胞吞噬后荧光增强来评估侵袭相关吞噬活性。

细胞周期同步化结合侵袭标记分析：先将细胞同步化于特定周期时相，再检测该时相细胞的侵袭相关分子表达。

多色荧光抗体组合方案：设计包含侵袭标记、细胞谱系标记、活性标记等的多色 panel，进行多参数关联分析。

微球吞噬或内化实验：使用荧光微球与细胞共孵育，通过流式检测细胞对微球的摄取能力，间接反映侵袭活性。

数据分析与门控策略：采用FSC/SSC设门排除碎片，利用荧光 minus one对照设门，进行群体分层和统计分析。

检测仪器设备

流式细胞仪：核心设备，用于检测荧光信号并进行多参数分析，至少需配备488nm和633nm等常用激光器。

细胞培养箱：提供恒定的温度、湿度和CO2浓度，用于细胞的常规培养、药物处理及侵袭实验前的准备。

超净工作台：提供无菌操作环境，用于细胞传代、实验操作，防止微生物污染。

低速离心机：用于细胞悬液的收集、洗涤以及荧光染色后去除未结合抗体等步骤。

涡旋振荡器：用于充分混匀细胞悬液或试剂，确保样本的均一性。

37℃恒温水浴锅：用于预热培养基、消化酶以及荧光染色过程中的温育步骤。

移液器及无菌吸头：精确移取不同体积的液体，包括细胞悬液、抗体、缓冲液等。

流式检测管：专用于流式细胞仪上样的圆底或尖底离心管，通常为聚苯乙烯材质。

细胞计数仪或血球计数板：用于精确计数细胞，确保每次实验的细胞接种数量一致。

数据分析软件：如FlowJo、FCS Express、BD FACSDiva等，用于流式数据的深入分析和图形绘制。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。