蛋白印迹仪化学发光法检测

检测项目

特定蛋白表达水平分析：用于定量或半定量检测细胞或组织样本中目标蛋白的表达丰度。

蛋白翻译后修饰检测：可特异性检测磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等蛋白修饰状态。

抗体特异性验证：验证新制备或商业抗体的特异性、灵敏度及交叉反应性。

信号通路激活状态分析：通过检测通路关键蛋白及其磷酸化形式，揭示信号通路的激活或抑制。

蛋白-蛋白相互作用验证：结合免疫共沉淀技术，验证推测的蛋白相互作用关系。

疾病生物标志物筛选：在疾病与正常样本中比较蛋白表达差异，筛选潜在的诊断或预后标志物。

基因功能研究：在基因过表达、敲低或敲除后，检测下游或相关蛋白的表达变化。

药物作用机制研究：评估药物处理后，靶点蛋白或信号通路相关蛋白的表达与修饰变化。

蛋白纯度与分子量鉴定：评估蛋白纯化产物的纯度，并依据分子量标准确定目标蛋白的表观分子量。

病毒或病原体蛋白检测：用于检测感染样本中病毒、细菌等病原体的特异性抗原蛋白。

检测范围

基础生命科学研究：涵盖分子生物学、细胞生物学、发育生物学等领域的基础蛋白功能探索。

肿瘤学研究：应用于癌基因/抑癌基因产物、增殖/凋亡相关蛋白、肿瘤标志物的检测。

神经科学研究：用于检测神经递质受体、离子通道、突触蛋白及神经退行性疾病相关蛋白。

免疫学与炎症研究：检测细胞因子、趋化因子、免疫球蛋白及炎症信号通路关键分子。

心血管疾病研究：涉及心肌损伤标志物、血管生成因子、凝血与纤溶系统相关蛋白的检测。

代谢性疾病研究：应用于糖尿病、肥胖等疾病相关的激素、受体及代谢酶的研究。

药物研发与药理学：贯穿靶点发现、药物筛选、药效评估及毒性测试等多个阶段。

临床诊断辅助：用于自身免疫性疾病（如自身抗体检测）、某些感染性疾病和癌症的辅助诊断。

农业与畜牧科学：检测转基因作物或动物的外源蛋白表达，或研究重要经济性状相关蛋白。

法医学与食品安全：用于物种鉴定、过敏原检测或特定毒素蛋白的鉴别分析。

检测方法

样本制备与蛋白提取：使用裂解液从细胞、组织或体液中提取总蛋白，并进行浓度定量。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据蛋白分子量大小，在电场作用下于凝胶中进行分离。

蛋白转印：通过湿转或半干转法将凝胶中分离的蛋白转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜上。

膜封闭：使用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。

一抗孵育：用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的蛋白进行杂交结合。

洗涤：使用TBST或PBST缓冲液洗去未结合及非特异性结合的一抗。

二抗孵育：孵育带有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的种属特异性二抗。

化学发光底物孵育：在暗室中，将膜与化学发光底物工作液充分接触，酶催化底物产生光信号。

信号采集与成像：使用化学发光成像仪或X光胶片捕获并记录膜上发出的光信号。

图像分析与定量：利用专业软件分析条带的光密度值，进行相对或绝对定量分析。

检测仪器设备

蛋白印迹仪：核心设备，通常包含电泳模块和转印模块，用于蛋白的分离与转移。

化学发光成像系统：配备高灵敏度CCD或CMOS相机的暗箱式成像仪，用于捕获和记录化学发光信号。

微量分光光度计：用于精确测定蛋白提取液的浓度，确保上样量一致。

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，配备制胶器、玻璃板、梳子等配件。

转印电泳槽：提供稳定电场，将凝胶中的蛋白高效转印至固相膜上。

恒温摇床：用于抗体孵育、膜封闭及洗涤过程中的温和振荡，确保反应均匀充分。

电源：提供电泳和转印过程所需的高压、恒压或恒流直流电源。

脱色摇床：用于电泳后凝胶的染色、脱色或转印后膜的洗涤过程。

移液器：一系列精密的微量移液器，用于样本、试剂和上样量的精确操作。

制冰机与冰箱：提供实验所需的冰块以维持电泳低温环境，以及用于试剂、抗体和样本的冷藏与冷冻储存。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。