高分辨质谱糖基化分析

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2026-05-27  

本检测系统阐述了高分辨质谱在糖基化分析领域的核心技术体系。本检测详细介绍了该技术所涵盖的关键检测项目、广泛的检测范围、主流的分析策略与方法学,以及核心的仪器设备配置。通过四个维度的深入解析,旨在为读者提供一份关于高分辨质谱糖基化分析的全面技术指南。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

糖基化位点鉴定:精确确定蛋白质上发生N-连接或O-连接糖基化的具体氨基酸残基位置。

糖型组成分析:解析附着在糖基化位点上的聚糖的具体单糖组成,如甘露糖、半乳糖、岩藻糖等。

糖链结构解析:深入分析聚糖的精细结构,包括糖苷键连接方式(α/β)、分支结构及糖环构型。

糖基化程度定量:测量特定蛋白质或肽段上糖基化修饰的总体丰度或占据率。

微观不均一性分析:鉴定和定量同一糖基化位点上存在的多种不同糖型,揭示其异质性。

唾液酸化分析:专门检测和定量聚糖末端的唾液酸残基,包括其连接类型(α2,3/α2,6)和乙酰化修饰。

岩藻糖基化分析:核心岩藻糖与天线岩藻糖的定性与定量分析,与炎症和癌症密切相关。

N-糖链与O-糖链谱图分析:分别绘制生物样本中N-连接聚糖和O-连接聚糖的整体表达谱。

糖肽分析:对带有完整聚糖的肽段进行直接分析,同时获得位点和糖型信息。

游离聚糖分析:对从糖蛋白上酶解释放或天然游离的聚糖混合物进行结构鉴定与定量。

检测范围

治疗性抗体:分析单克隆抗体、双特异性抗体等的Fc/Fab段糖基化,监控关键质量属性如ADCC效应。

血浆/血清糖蛋白:如免疫球蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白等的糖基化修饰,用于疾病生物标志物发现。

细胞膜表面糖蛋白:分析细胞表面受体、粘附分子等的糖基化变化,研究细胞通讯与识别。

组织与细胞裂解液:对复杂生物样本中的整体糖蛋白组进行大规模鉴定与定量分析。

分泌物糖蛋白:如唾液、泪液、乳汁中的糖蛋白,研究其功能与疾病关联。

植物与微生物糖蛋白:分析具有不同糖基化特征的植物凝集素或微生物表达的重组蛋白。

糖脂与蛋白聚糖:扩展至糖缀合物的其他类型,如鞘糖脂和糖胺聚糖的结构分析。

生物制药工艺样品:监控细胞培养、纯化、制剂等生产环节中糖基化谱的变化,确保产品一致性。

临床前与临床样本:应用于疾病模型动物样本或病人样本,进行转化医学研究。

食品与中药糖蛋白:鉴定天然产物中具有生物活性的糖蛋白成分及其糖链结构。

检测方法

Bottom-up蛋白质组学法:将糖蛋白酶解为糖肽后,通过液相色谱-质谱联用进行分析,是主流策略。

糖释放与标记法:使用PNGase F等酶释放N-糖链,并用2-AB等荧光试剂标记后进行LC-MS或CE-MS分析。

亲水相互作用色谱法:利用HILIC色谱柱高效分离亲水性糖肽或标记后的聚糖,提高检测灵敏度。

电子转移解离/高能碰撞解离:结合ETD/HCD的碎裂模式,在MS/MS中同时获得肽段序列和糖链碎片信息。

多反应监测/平行反应监测:采用MRM/PRM靶向质谱技术,对已知的重要糖肽或糖型进行高灵敏度定量。

数据依赖采集:采用DDA模式进行非靶向糖蛋白组学筛查,全面发现样品中的糖基化修饰。

数据非依赖采集:应用SWATH、DIA等DIA模式,实现大规模糖肽的无偏、可重现定量分析。

离子淌度分离技术:在质谱分析前引入离子淌度分离,根据碰撞截面积差异区分异构糖链。

糖数据库搜索:利用Byonic、pGlyco等专用软件,在庞大的糖结构数据库中匹配MS/MS谱图。

糖链从头测序:基于高精度MS/MS碎片离子,不依赖数据库,直接推导未知聚糖的拓扑结构。

检测仪器设备

轨道阱系列高分辨质谱仪:如Orbitrap Exploris、Fusion系列,提供超高分辨率和质量精度,是糖基化分析的核心设备。

四极杆-飞行时间质谱仪:如TripleTOF、Xevo G2-XS QTOF,具备高速扫描和高分辨率,适合DIA和糖型筛查。

纳升液相色谱系统:提供超低流速的色谱分离,与质谱联用极大提高糖肽/聚糖的检测灵敏度与峰容量。

超高效液相色谱系统:用于常规流速下的高效分离,特别是对标记后聚糖或复杂生物样本的前处理分析。

毛细管电泳-质谱联用系统:CE-MS平台,基于迁移时间分离,特别适合带电唾液酸化糖型的异构体分离。

离子淌度质谱仪:如timsTOF、Select Series Cyclic IMS,在传统m/z分离基础上增加淌度维,提升异构体分辨能力。

基质辅助激光解吸电离源:MALDI源与TOF或Orbitrap联用,适合高通量、快速糖型谱图分析及成像。

自动化样品前处理平台:实现糖蛋白酶解、糖链释放、纯化、标记等步骤的自动化,提高重现性和通量。

荧光检测器:与HPLC联用,用于检测荧光标记聚糖,提供高灵敏度的定量信号。

专用数据分析工作站与软件:配备高性能计算服务器及Byonic、GlycoWorkbench、Skyline等专业分析软件。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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