磷酸化信号通路抑制测试

检测项目

激酶活性抑制率：评估抑制剂对特定靶点激酶催化活性的直接抑制效果，是评价抑制剂效力的核心指标。

磷酸化蛋白水平变化：检测信号通路中关键节点蛋白（如Akt， ERK， STAT3）磷酸化水平的降低程度。

细胞增殖抑制率：通过细胞活力实验（如CCK-8， MTT）评估抑制剂对细胞生长的抑制能力。

细胞周期阻滞分析：检测抑制剂是否通过影响信号通路导致细胞周期在特定时相（如G1/S期）发生阻滞。

细胞凋亡诱导率：评估抑制剂能否激活下游凋亡通路，通过Annexin V/PI等方法量化凋亡细胞比例。

下游基因表达变化：利用qPCR或RNA-seq分析受该信号通路调控的靶基因（如c-Myc， Cyclin D1）表达量的改变。

抑制剂半数抑制浓度：测定抑制剂的IC50值，量化其抑制特定靶点或细胞活性的效力。

信号通路报告基因活性：使用构建的报告基因系统（如荧光素酶报告基因）评估通路转录活性的抑制情况。

蛋白-蛋白相互作用影响：检测抑制剂是否干扰信号通路中关键蛋白复合物的形成（如通过Co-IP或FRET技术）。

药物选择性谱分析：在激酶组或蛋白组水平评估抑制剂对非靶标分子的脱靶效应，确定其选择性。

检测范围

受体酪氨酸激酶通路：涵盖EGFR， VEGFR， PDGFR等受体及其下游的RAS/RAF/MEK/ERK和PI3K/Akt/mTOR通路抑制测试。

丝裂原活化蛋白激酶通路：重点检测对MAPK家族成员（ERK， JNK， p38）及其上游激酶的抑制效果。

PI3K/Akt/mTOR通路：针对该经典生存与生长通路的各个节点（PI3K， Akt， mTORC1/2）进行抑制效能评估。

JAK-STAT信号通路：评估抑制剂对JAK家族激酶活性及STAT蛋白磷酸化与核转位的阻断作用。

Wnt/β-catenin通路：检测抑制剂对β-catenin稳定性、核内积累及其转录活性的影响。

TGF-β/Smad通路：评估对TGF-β受体激酶活性及Smad蛋白磷酸化与复合物形成的抑制。

Hedgehog信号通路：针对Smo受体或Gli转录因子的活性进行抑制测试。

细胞周期相关激酶通路：涵盖对CDK， Aurora激酶， PLK等调控细胞周期进程关键激酶的抑制研究。

DNA损伤应答通路：评估对ATM， ATR， Chk1， Chk2等激酶介导的损伤应答信号的抑制。

凋亡相关信号通路：检测对死亡受体通路或线粒体通路中关键调控节点（如Caspase级联反应）的影响。

检测方法

酶联免疫吸附测定：使用磷酸化特异性抗体，通过ELISA定量检测溶液或细胞裂解液中特定磷酸化蛋白的水平。

蛋白质免疫印迹：经典的Western Blot技术，用于半定量分析细胞或组织中信号蛋白总水平及磷酸化水平的变化。

免疫组织化学/免疫荧光：在组织切片或细胞爬片上原位观察和定量磷酸化蛋白的定位与表达强度变化。

流式细胞术：利用磷酸化特异性抗体进行细胞内染色，快速、定量分析大量细胞中磷酸化信号的变化。

激酶活性检测试剂盒：基于荧光、发光或放射性原理，在体外直接测量纯化激酶或免疫沉淀激酶的活性抑制。

高通量筛选技术：采用微孔板形式，结合自动化设备，对大量化合物库进行激酶活性或细胞表型的高通量抑制测试。

质谱磷酸化蛋白质组学：通过LC-MS/MS系统性地鉴定和定量全细胞或特定细胞器中成千上万个磷酸化位点的变化。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测抑制剂分子与靶点激酶之间的结合动力学参数（如KD值）。

细胞热位移分析：基于蛋白质热稳定性原理，验证抑制剂在活细胞内与靶标蛋白的结合情况。

报告基因检测法：将信号通路响应元件与报告基因（如荧光素酶， GFP）相连，定量检测通路转录活性的抑制。

检测仪器设备

酶标仪：用于读取ELISA， 细胞活力检测（CCK-8， MTT）及多种比色/荧光/化学发光检测的信号。

蛋白电泳及转印系统：包括电泳槽、电源和湿转/半干转印仪，是进行Western Blot分析的核心设备。

化学发光成像系统：用于捕获和定量分析Western Blot膜、凝胶等样品发出的化学发光或荧光信号。

流式细胞仪：能够快速对单个细胞进行多参数分析，是进行磷酸化流式细胞术的必备仪器。

激光共聚焦显微镜：提供高分辨率、高对比度的细胞/组织切片图像，用于免疫荧光染色结果的精细观察与定量。

实时荧光定量PCR仪：精确检测信号通路下游靶基因的mRNA表达水平变化，评估抑制效果。

高通量微孔板检测系统：整合自动化液体处理、孵育和读板功能，用于大规模化合物筛选。

液相色谱-串联质谱联用仪：进行磷酸化蛋白质组学研究的核心设备，用于大规模磷酸化肽段的分离、鉴定与定量。

表面等离子共振仪：用于实时、无标记地分析小分子抑制剂与靶蛋白之间的相互作用动力学。

细胞能量代谢分析仪：通过测量细胞耗氧率和酸化率，间接评估影响细胞代谢的信号通路抑制效果。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。