肝微粒体代谢速率测试

检测项目

固有清除率测定：评估药物在肝微粒体中被代谢酶消除的固有速率，是预测体内肝清除的基础参数。

代谢稳定性测试：通过测定孵育后原型药物的剩余量，评价化合物在代谢过程中的稳定性，筛选高代谢稳定性的候选药物。

代谢表型鉴定：利用特异性化学抑制剂或重组单酶，确定参与药物代谢的主要细胞色素P450亚型。

酶动力学参数测定：包括米氏常数、最大反应速率等，用于量化代谢酶对底物的亲和力和催化效率。

时间依赖性抑制评估：检测药物或其代谢物是否会引起代谢酶的不可逆或准不可逆失活，预测潜在的药物相互作用风险。

可逆性抑制评估：测定化合物对特定CYP450酶的竞争性或非竞争性抑制作用及其抑制强度。

代谢产物鉴定与谱图分析：利用高分辨质谱等技术，定性并定量分析药物经微粒体代谢后生成的产物。

种属差异比较：比较不同种属肝微粒体对同一药物的代谢差异，为临床前研究到临床研究的种属外推提供依据。

反应性代谢物筛查：通过捕获实验等方法，检测可能形成的活性中间体，评估其潜在的毒性风险。

血浆蛋白结合率校正：结合游离药物浓度，对体外测得的代谢数据进行校正，以更准确地预测体内情况。

检测范围

小分子化学创新药：新药研发早期阶段，对大量候选化合物进行高通量的代谢稳定性筛选和优化。

中药活性成分：研究天然产物单体在肝脏中的代谢途径、速率及可能产生的活性或毒性代谢物。

农药与环境污染物：评估外源性化学物质在生物体内的代谢活化或解毒过程，进行毒理学风险评估。

食品添加剂及保健品成分：考察其经肝脏代谢的安全性及潜在的对药物代谢酶的干扰作用。

已上市药物的再评价：研究已知药物的新代谢途径、个体差异来源或潜在的药物相互作用机制。

前体药物：验证前药在肝脏中转化为活性形式的效率和特异性。

CYP450酶底物特异性研究：用于确定特定CYP450亚型的新底物，丰富酶学数据库。

CYP450酶诱导剂/抑制剂评价：系统评价候选化合物或天然产物对主要CYP450酶活性的影响。

跨膜转运蛋白的间接研究：结合其他技术，间接推断药物外排或摄取对微粒体代谢表现的影响。

法医毒理学样本分析：协助鉴定可疑物质在体内的主要代谢路径，为毒物鉴定提供依据。

检测方法

温解法：将肝微粒体与待测物、辅因子在适宜缓冲液中共同孵育，是最经典和基础的实验方法。

NADPH再生系统法：在孵育体系中加入NADP+、葡萄糖-6-磷酸及脱氢酶，持续生成NADPH以维持反应。

LC-MS/MS定量分析法：使用液相色谱-串联质谱高灵敏度、高选择性地定量分析原型药物及其代谢物浓度。

Cocktail探针底物法：将多种CYP450亚型的特异性底物混合孵育，一次性评价化合物对多个酶的抑制潜力。

荧光/发光底物法：使用能产生荧光或化学发光信号的底物进行高通量筛选，快速评估酶活性或抑制情况。

差示光谱法：利用底物或抑制剂与CYP450血红素铁结合引起特征光谱变化的原理，测定结合常数和类型。

放射性标记示踪法：使用放射性同位素标记的待测物，通过检测放射性代谢产物来追踪其代谢命运。

谷胱甘肽捕获实验：在孵育体系中加入谷胱甘肽，用于捕获并检测亲电性的反应性代谢中间体。

蛋白沉淀-离心法：使用有机溶剂沉淀孵育终止后的反应液中的蛋白质，离心取上清液用于后续分析。

固相萃取/液液萃取前处理法：对孵育后样本进行萃取富集和净化，以提高分析物的检测灵敏度和选择性。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：用于分离复杂的生物样本中的待测物及其代谢产物，是连接样品制备与检测的关键设备。

三重四极杆质谱仪: 作为LC-MS/MS系统的核心检测器，提供极高的灵敏度和特异性，用于目标物的精确定量。

<强高分辨质谱仪<强>: 如Q-TOF或Orbitrap, 用于未知代谢产物的结构鉴定和全局性非靶向代谢组学分析。< p>

<强恒温振荡金属浴<强>: 为肝微粒体温解反应提供精确且均匀的温度控制及适度的振荡混匀。< p>

<强超高速冷冻离心机<强>: 用于肝组织的匀浆后分离、微粒体制备以及反应终止后样本的快速低温离心。< p>

<强多功能酶标仪<强>: 适用于基于荧光、发光或紫外-可见光吸收原理的高通量酶活性筛选实验。< p>

<强氮气吹干浓缩仪<强>: 用于对萃取后的样本溶液进行温和、快速的浓缩，以提高进样浓度。< p>

<强大容量低温冰箱<强>: 用于长期保存肝组织、制备的肝微粒体、标准品及不稳定试剂，确保生物活性和稳定性。< p>

<精密pH计< strong>: 精确配制孵育所需的缓冲溶液及其他试剂, 确保反应体系pH值的准确性。< p>

<超纯水系统< strong>: 提供符合要求的超纯水, 用于配制所有溶液、清洗器皿, 避免杂质干扰实验结果。< p>

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。