蛙病毒感染技术检测

检测项目

病原体分离培养、核酸提取纯化、PCR扩增反应、实时荧光定量PCR(qPCR)、逆转录PCR(RT-PCR)、巢式PCR(NestedPCR)、全基因组测序(WGS)、Sanger测序验证、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光染色(IFA)、病毒中和试验(VNT)、血凝抑制试验(HI)、电镜形态学观察、病毒滴度测定(TCID50)、空斑形成试验(PFU)、限制性片段长度多态性分析(RFLP)、熔解曲线分析(MCA)、数字PCR(dPCR)、宏基因组测序(mNGS)、蛋白质印迹(WesternBlot)、流式细胞术(FCM)、组织病理学检查(H&E染色)、原位杂交(ISH)、免疫组化(IHC)、细胞病变效应(CPE)观察、宿主基因表达谱分析、病毒载量定量分析、抗体亲和力测定、抗原表位定位分析、宿主免疫应答评估

检测范围

牛蛙蝌蚪肝脏组织、林蛙成体皮肤拭子、虎纹蛙肌肉组织切片、养殖池水样沉淀物、人工饲料残留样本、孵化场卵膜碎片、运输箱体表面拭子、实验感染脾脏匀浆液、脑组织石蜡包埋切片、肠道内容物提取物、肾脏细胞培养上清液、血液抗凝全血样本、皮肤黏液冷冻保存液、环境底泥离心沉淀物、疫苗生产用鸡胚尿囊液、实验动物粪便悬液、生物反应器培养液滤膜截留物、冷冻保存精液样本、病理标本福尔马林固定液、实验器材清洗废水样本、活体运输水体过滤膜片、人工授精操作台面拭子、解剖器械灭菌验证样本、低温运输箱冷凝水样本、疫苗佐剂残留物分析样本、实验动物垫料浸出液样本、细胞培养基质控样本、消毒剂效力验证样本、基因工程重组质粒对照品、疫苗效力验证攻毒样本

检测方法

实时荧光定量PCR法：基于TaqMan探针技术定量测定病毒DNA/RNA拷贝数，灵敏度达10copies/μL。

透射电子显微镜法：通过负染色技术观察病毒颗粒形态特征及衣壳结构完整性。

病毒分离培养法：使用FHM细胞系进行病毒扩增并观察特征性细胞病变效应。

高通量测序法：采用IlluminaNovaSeq平台完成全基因组denovo组装及变异位点分析。

微滴式数字PCR法：通过微流控芯片实现绝对定量分析消除扩增效率干扰。

免疫磁珠捕获法：利用表面修饰抗体快速富集低浓度环境样本中的病毒颗粒。

流式细胞分选术：采用荧光标记抗体实现感染细胞的精准识别与定量统计。

冷冻超薄切片技术：保持病毒粒子原位分布状态进行高分辨率电镜观察。

多重连接探针扩增：同步检测8种常见蛙病毒亚型的特异性基因片段。

表面等离子共振技术：实时监测病毒衣壳蛋白与宿主受体的结合动力学参数。

检测标准

GB/T34755-2017蛙类病毒病诊断技术规范

OIETerrestrialManual2023Chapter3.1.1Ranavirusinfection

ISO20976-1:2019体外感染模型建立指南

SN/T5485-2022进出口两栖动物检疫规程

NY/T4059-2021水产养殖用疫苗效力评价规范

ASTME3060-16实时PCR定量分析标准指南

CLSIMM06-A2分子诊断方法验证指南

EPIZONESOP-VR-002病毒分离标准操作程序

USFWSAQUAVET-03水生动物疫病监测手册

JISK3850-3:2020空气微生物采集与分析方法

检测仪器

QuantStudio7Pro实时荧光定量PCR系统：配备5色光学模块实现多重靶标同步检测。

TecnaiG2Spirit透射电子显微镜：120kV加速电压下可达0.34nm晶格分辨率。

CovarisM220超声破碎仪：精确控制DNA片段化程度保障文库构建质量。

NanoporeMinION测序仪：基于纳米孔技术实现长读长实时测序分析。

BDFACSAriaIII流式细胞分选仪：70μm喷嘴实现单细胞级分选精度。

BioRadQX200微滴式数字PCR系统：可生成20,000个纳升级反应单元。

TissueLyserII组织匀浆器：50Hz高频振荡实现快速样品均质化处理。

MultiSkanSkyHigh酶标仪：支持6种以上波长同步扫描的吸光度检测平台。

CryoStarNX50程序降温仪：精确控制细胞冻存过程维持病毒活性。

MiltenyiMACSQuantTyto分选仪：无鞘液封闭式芯片设计避免气溶胶污染。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。