磷酸化标记核酸检测

检测项目

蛋白激酶A活性测定、MAPK信号通路磷酸化分析、组蛋白H3磷酸化位点鉴定、Tau蛋白过度磷酸化检测、EGFR酪氨酸激酶活性测定、AMPKα1/α2磷酸化水平分析、STAT3转录因子激活状态检测、NF-κB信号通路磷酸化监测、Cyclin依赖性激酶活性验证、AKT/mTOR通路磷酸化修饰分析、p53蛋白Ser15位点磷酸化定量、JNK应激通路激活状态测定、GSK-3β活性抑制分析、CREB转录因子磷酸化验证、Rb蛋白细胞周期调控位点检测、c-Fos/c-Jun异源二聚体形成监测、PI3K下游效应分子磷酸化图谱构建、Bcl-2家族蛋白修饰状态分析、TGF-β受体Smad通路磷酸化追踪、CDK抑制剂p27磷酸化降解监测、ERK1/2双位点磷酸化验证、FAK粘着斑激酶活性测定、PKC亚型特异性激活分析、S6核糖体蛋白磷酸化定量、IRS-1酪氨酸磷酸化水平检测、Chk1/Chk2DNA损伤响应监测、H2AX组蛋白γ位点磷酸化分析、Myosin轻链激酶活性测定、PPARγ配体依赖性修饰验证。

检测范围

哺乳动物细胞系培养物（HEK293T/HeLa/MCF-7）、原代神经元培养物、肿瘤组织冰冻切片（乳腺癌/肺癌/结直肠癌）、外周血单个核细胞分离样本、脑脊液游离核酸样本、石蜡包埋组织切片（厚度5μm）、线粒体分离组分（纯度≥90%）、核蛋白提取物（浓度≥1μg/μL）、外泌体富集样本（超速离心法）、血清/血浆游离DNA样本（采集量≥2mL）、骨髓穿刺液样本（抗凝处理）、尿液沉渣细胞样本（离心3000rpm10min）、植物原生质体分离样本（拟南芥/水稻）、昆虫细胞表达系统产物（Sf9/Sf21）、细菌重组蛋白表达产物（BL21菌株）、酵母双杂交系统捕获复合物（S.cerevisiae）、染色质免疫共沉淀产物（超声破碎至200-500bp）、蛋白质芯片固定样本（点样密度≥1000spots/cm）、流式细胞分选特定亚群细胞（纯度≥95%）、激光显微切割组织区域样本（面积≥0.1mm）、三维类器官培养模型（培养周期≥14天）、斑马鱼胚胎整体原位杂交样本（发育阶段10-20体节期）、冷冻电镜制样悬液（浓度≥3mg/mL）、微量石蜡切片抗原修复样本（高压修复120℃3min）、微量全血直接裂解产物（体积≤50μL）。

检测方法

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（MALDI-TOFMS）：通过特征性质量位移识别磷酸化位点，分辨率达20000FWHM以上；
电化学发光免疫分析法（ECLIA）：采用钌标记二抗实现超敏检测，灵敏度达fg/mL级；
磷放射性同位素标记法：使用γ-32PATP进行体外激酶反应，需配备铅屏蔽操作台；
荧光共振能量转移技术（FRET）：构建特异性探针对实时监测动态磷酸化过程；
表面等离子体共振成像（SPRi）：无标记实时检测分子互作动力学参数；
毛细管电泳-激光诱导荧光联用技术（CE-LIF）：适用于微量样本的高通量筛查；
原子力显微镜纳米力学分析：通过探针力曲线变化识别单分子水平修饰状态；
时间分辨荧光能量转移技术（TR-FRET）：采用铕螯合物供体降低背景干扰；
微流控芯片数字PCR系统：实现单分子级别磷酸化变异体绝对定量；
超高效液相色谱-串联质谱联用技术（UHPLC-MS/MS）：保留时间偏差≤0.1min。

检测标准

ISO15189:2022《医学实验室质量和能力要求》
GB/T27417-2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》
ASTME2554-18《生物标志物免疫测定方法验证标准指南》
CLSIEP05-A3《临床化学设备精密度评价方案》
ICHQ2(R1)《分析方法验证：正文与方法学》
ISO17025:2017《检测和校准实验室能力的通用要求》
USP〈1225〉《药典分析方法验证》
GB/T37864-2019《生物样品中蛋白质类标志物的LC-MS/MS定量方法指南》
AOAC2015.09《食品中过敏原蛋白质的LC-MS/MS确证方法》
ENISO10993-18:2020《医疗器械生物学评价第18部分：化学表征》。

检测仪器

三重四极杆质谱仪（QqQMS）：配备电喷雾离子源（ESI），质量精度0.01Da；
全自动Westernblot成像系统：支持化学发光/近红外双模式检测；
高通量流式细胞分选仪：配置405nm/488nm/640nm三激光器；
数字PCR微滴生成仪：单次反应可产生20000个纳升级微滴；
超分辨显微成像系统：STED技术实现50nm空间分辨率；
等温滴定量热仪（ITC）：测量结合常数范围103~109M-1；
生物分子相互作用分析仪：最大采样频率10Hz；
多功能酶标仪：支持吸光度/荧光/化学发光/TRF四种模式；
纳米颗粒跟踪分析仪（NTA）：粒径测量范围10-2000nm；
全自动核酸蛋白相互作用分析系统：通量达96孔/次。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。