猪多能干细胞建系规范检测

检测项目

细胞形态学观察、核型分析、端粒酶活性测定、碱性磷酸酶染色、表面标志物表达谱分析（SSEA-1/SSEA-4/TRA-1-60/TRA-1-81）、三胚层分化能力验证（外胚层/中胚层/内胚层）、支原体污染检测、病毒载量测定（PCV/PPV/PRRSV）、染色体G显带分析、线粒体基因组测序、STR分型鉴定、细胞周期测定、凋亡率检测、克隆形成效率评估、端粒长度定量、DNA甲基化水平分析（5mC/5hmC）、RNA完整性检测（RIN值）、蛋白质印迹验证（OCT4/NANOG/SOX2）、代谢组学分析（糖酵解/氧化磷酸化）、细胞冻存复苏存活率测试、致瘤性试验（裸鼠移植）、微生物限度检查（需氧菌/厌氧菌/真菌）、内毒素含量测定（LAL法）、细胞交叉污染鉴定（种属特异性基因）、细胞传代稳定性监测（P0-P30）、表观遗传修饰分析（组蛋白H3K27me3/H3K4me3）、转座子活性检测、线粒体膜电位测定、活性氧水平定量、细胞粘附力测试。

检测范围

原代分离的猪胚胎干细胞、诱导多能干细胞（iPSC）克隆团、传代培养的P3-P30代次细胞悬液、冻存复苏后的活细胞样本、分化诱导后的三胚层细胞群、细胞培养上清液基质样本、细胞裂解液提取物（DNA/RNA/蛋白质）、微载体培养的3D球状体样本、转染重组载体的工程化细胞株、基因编辑后的单克隆细胞系（CRISPR/Cas9）、共培养体系中的间充质干细胞混合样本、无血清培养基残留物样本、胎牛血清替代物测试样本、细胞冻存保护剂成分分析样本（DMSO/甘油）、生物反应器扩增的大规模培养样本（50L体系）、贴壁培养的微孔板单层细胞样本（6/24/96孔板）、Transwell迁移实验后的滤膜附着细胞样本、流式分选后的CD90+/CD44+阳性亚群样本、激光显微切割获取的单细胞样本（10μm直径）、电转染后的瞬时表达细胞样本（48h内）、药物筛选后的耐药性细胞亚群样本（嘌呤霉素/G418）、低氧培养条件下的应激反应细胞样本（5%O2浓度）、外泌体分离纯化样本（超速离心法）、细胞外基质成分分析样本（层粘连蛋白/纤连蛋白）、代谢废物累积测试样本（乳酸/氨浓度）、光照刺激后的光敏基因修饰细胞样本（Optogenetics系统处理）、磁珠分选的CD34+造血干祖细胞样本。

检测方法

流式细胞术：采用FACSCantoII系统进行表面标志物定量分析，设置488nm/640nm双激光通道同步检测SSEA-4与TRA-1-81荧光信号强度。

核型分析：通过秋水仙素阻滞法获得中期分裂相，经Giemsa染色后使用全自动染色体扫描仪进行G显带核型配对。

qRT-PCR：设计物种特异性引物对OCT4/NANOG进行SYBRGreen法扩增，采用ΔΔCt法计算多能性基因相对表达量。

全基因组甲基化测序：应用IlluminaNovaSeq6000平台完成亚硫酸盐转化文库构建，通过Bismark软件比对分析CpG岛甲基化水平。

透射电镜观察：固定包埋后制备70nm超薄切片，使用JEM-1400Flash电镜在120kV加速电压下观察线粒体嵴结构完整性。

微滴式数字PCR：采用Bio-RadQX200系统对猪内源性逆转录病毒（PERV）进行绝对定量分析。

检测标准

ISO20387:2018生物技术-生物样本库通用要求

GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求

YY/T0606.25-2014组织工程医疗产品第25部分：动物源性生物材料DNA残留量测定法

USP<1043>细胞基因治疗产品特性分析

EP2.6.7欧洲药典支原体检测规范

ASTMF2944-12间充质干细胞表征标准指南

ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验

GB/T39730-2020细胞纯度测定通用要求

ICHQ5D来源于人或动物细胞系的生物技术产品的质量要求

ISO21571:2005食品中转基因生物核酸提取方法

检测仪器

流式细胞仪：BDFACSAriaIII配备405nm/488nm/640nm三激光系统，实现多色荧光同步分析表面标志物表达谱。

实时荧光定量PCR仪：ABIQuantStudio7Pro支持高通量384孔板运行，具备熔解曲线自动分析功能。

全自动染色体扫描系统：Metafer4平台集成AI图像识别算法，可完成中期分裂相自动捕获与核型排列。

超高效液相色谱质谱联用仪：WatersXevoTQ-Smicro配置ESI离子源，用于代谢组学小分子化合物精准定量。

激光共聚焦显微镜：LeicaTCSSP8STED3X具备STED超分辨模块，实现亚细胞结构三维重构。

生物反应器在线监测系统：SartoriusBIOSTATSTR配备DO/pH/Temperature三参数光纤传感器。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。