番茄茎腐病菌检疫检测

检测项目

病原菌分离培养、菌丝形态观察、分生孢子特征分析、致病性测定、ITS序列分析、β-tubulin基因扩增、EF-1α基因测序、COXⅡ基因鉴定、实时荧光定量PCR检测、LAMP快速检测、免疫胶体金试纸条筛查、酶联免疫吸附试验(ELISA)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)鉴定、菌落形态特征记录、产孢结构显微观察、温度敏感性试验、pH适应性测试、杀菌剂抗性监测、寄主范围测定、土壤带菌量分析、种子表面消毒效果验证、病残体存活周期监测、灌溉水微生物过滤检测、农具表面拭子采样培养、气传孢子捕捉计数、潜伏侵染组织切片观察、超微结构电镜扫描、挥发性代谢产物GC-MS分析、细胞壁降解酶活性测定、毒素产生能力验证

检测范围

番茄茎基部病健交界组织、叶柄维管束切片、根系腐烂样本、果实脐腐病变部位、育苗基质残留物、嫁接刀具表面拭子、温室支撑架生物膜样本、滴灌带内壁沉积物、采收筐木质结构碎屑、包装材料纤维素残留物、冷库冷凝水样品、运输车辆厢体粉尘样本、砧木切口渗出液、组培苗培养基残留物、堆肥发酵物料样本、地表径流沉淀物、地下水过滤膜截留物、昆虫介体消化道内容物、鸟类粪便颗粒物、农机轮胎附着土壤颗粒物、种子表面微生物群落样本种衣剂溶解液悬浮物气雾栽培营养液循环系统滤膜截留物有机肥未腐熟物质大棚塑料膜凝结水珠样本农业废弃物堆置场渗滤液样本实验室培养基污染源样本外来引种材料离体保存组织国际邮包填充物碎屑跨境电商商品包装纸箱样本

检测方法

组织分离培养法：采用PDA选择性培养基进行病原菌纯化培养，通过添加链霉素和利福平抑制杂菌生长。

显微形态计量法：使用微分干涉显微镜测量分生孢子梗分枝角度及产孢细胞特征参数。

多重PCR技术：基于TEF1α和RPB2基因设计特异性引物组实现复合扩增。

实时荧光定量PCR：建立SYBRGreenI熔解曲线分析体系进行病原菌绝对定量。

LAMP快速检测：针对GAPDH基因保守区设计环介导等温扩增引物组。

免疫磁珠富集技术：利用单克隆抗体包被磁珠实现复杂基质中靶标菌富集。

微滴数字PCR：通过微流控芯片分割反应体系提高低浓度样本检出率。

全基因组重测序：采用IlluminaNovaSeq平台进行SNP位点比对分析。

代谢组学分析：运用UHPLC-QTOF-MS技术解析特征性次级代谢产物谱。

扫描电镜观察：临界点干燥法制备样品后观察分生孢子器超微结构。

检测标准

GB/T36851-2018植物检疫性真菌检测规范

SN/T4283.2-2015国境口岸番茄病害检疫鉴定规程

NY/T401-2020蔬菜种子产地检疫规程

ISPM27国际植物检疫措施标准-限定性有害生物诊断协议

EPPOPM7/129欧洲及地中海区域植物保护组织诊断标准

ISO16140-3:2021微生物学方法验证-第3部分：参考方法确认协议

GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

GB/T28658-2012进出口鲜食番茄检疫规程

APPPCRSPM12亚太植物保护委员会区域标准-茄科作物病害监测指南

USDAPPQProtocolCPHST-BL-01美国农业部植物检疫实验室操作规范

检测仪器

生物安全柜：提供ISOClass5洁净环境用于病原菌分离操作。

恒温振荡培养箱：维持251℃条件下进行液体震荡培养。

冷冻切片机：制备10μm厚度的植物组织病理切片样本。

荧光定量PCR仪：执行TaqMan探针法的实时扩增曲线分析。

全自动微生物鉴定系统：基于碳源利用数据库进行表型鉴定。

激光共聚焦显微镜：实现三维重构观察菌丝侵染过程。

超高效液相色谱仪：分离真菌毒素类小分子化合物。

纳米孔测序仪：开展田间快速全基因组测序分析。

气溶胶采样器：收集温室空气中传播的分生孢子颗粒。

超低温冰箱：-80℃长期保存标准菌株及阳性对照样品。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。