玉簪属植物X病毒鉴定检测

检测项目

病毒粒子形态观察、外壳蛋白分子量测定、核酸序列比对分析、血清学特异性检测、dsRNA提取鉴定、RT-PCR扩增产物测序、实时荧光定量PCR阈值判定、ELISA吸光度值测定、免疫胶体金试纸条显色反应、生物测定寄主范围验证、电子显微镜负染观察、病毒分离纯化培养、基因重组事件筛查、卫星RNA辅助因子检测、传播介体特异性验证、温度钝化点测定、稀释限点试验、体外存活期测定、交叉保护作用评估、系统侵染模式追踪、症状学特征记录分析、分子标记开发验证、多克隆抗体制备效价测试、单克隆抗体特异性验证、Westernblot杂交验证、Northernblot核酸杂交分析、SouthernblotDNA杂交确认、原位杂交组织定位观察、二代测序宏基因组分析、三代测序全长基因组组装。

检测范围

玉簪'金色收获'病叶样本、'蓝象牙'组培苗茎尖分生组织、'爱国者'根状茎切片样本、'六月'新生叶脉组织液、"法兰西"花序浸出液、"圣诞前夜"叶肉原生质体、"巨无霸"叶绿体分离液、"月光"韧皮部汁液、"皇家荣耀"表皮细胞刮取物、"翡翠城"维管束横切面、"白羽"叶缘坏死斑块、"金边"褪绿区域取样、"蓝天使"水渍状病斑组织、"紫萼"畸形叶片样本、"花叶"品种典型斑驳区域、"银纹"品种叶背绒毛取样、"皇冠"品种顶芽生长点、"雪线"品种冻害鉴别样本、"霓虹灯"品种嫁接接穗、"秋霞"品种种子胚乳提取物、"冬青"品种愈伤组织培养物、"翡翠之星"水培营养液残留物、"帝王"品种土壤根际微生物群、"曙光"品种传毒蓟马虫体研磨液、"碧玉"品种蚜虫口针冲洗液、"青龙"品种病株根系分泌物、"白玉"品种灌溉水样过滤物、"墨玉"品种修剪工具表面擦拭样、"金丝雀"品种组培瓶内气体采样、"玄武岩"品种温室空气微粒收集样本。

检测方法

双抗体夹心ELISA法：采用多克隆抗体包被微孔板捕获病毒粒子，酶标二抗显色定量分析抗原浓度。

巢式RT-PCR技术：设计内外两对引物进行两轮扩增，提高HostavirusX特异性序列检出灵敏度。

免疫电镜技术：胶体金标记抗体与病毒粒子表面抗原结合实现可视化定位观察。

高通量测序法：通过IlluminaNovaSeq平台进行小RNA深度测序，结合生物信息学流程重建病毒基因组。

实时荧光定量PCR：采用TaqMan探针法建立标准曲线进行病毒载量绝对定量分析。

双向电泳技术：分离病毒外壳蛋白并进行MALDI-TOF质谱鉴定获得肽质量指纹图谱。

组织印迹杂交法：将新鲜叶片横切面压印于尼龙膜进行核酸原位固定与探针杂交显色。

生物芯片技术：定制包含HVX保守区探针的微阵列芯片实现多重病原同步筛查。

超速离心纯化法：采用蔗糖密度梯度离心结合差速离心获取高纯度病毒粒子悬液。

指示植物接种法：使用昆诺藜作为鉴别寄主观察特征性局部枯斑反应。

检测标准

GB/T31735-2015植物病毒检测规范

SN/T2123-2008进出境种苗病毒检疫规程

ISPM27-2006限定性有害生物诊断规程

EPPOPM7/98(2)植物病毒诊断标准程序

ISO17025-2017检测实验室能力通用要求

GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

NY/T401-2000脱毒种苗病毒检测技术规程

APFISPPQProtocol-0301植物病原体分子检测验证指南

ASPV-TP-01-2019国际植物病理学会病毒诊断技术规范

JISK3850-3-2018空气中微生物粒子采集与分析方法

检测仪器

全自动酶标分析系统：配备双波长滤光片的SpectraMaxM5型酶标仪实现96孔板高通量OD值读取。

梯度PCR扩增仪：ABIVeriti系列具备热盖压杆技术确保0.2mL管反应体系温度均一性。

冷冻超薄切片机：LeicaUC7搭配钻石刀制备80nm厚度样品用于透射电镜观察。

激光共聚焦显微镜：OlympusFV3000配置405/488/561/640nm四激光器进行多重荧光标记成像。

超高效液相色谱仪：WatersACQUITYUPLCH-Class系统实现病毒蛋白亚基精细分离。

纳米颗粒分析仪：MalvernZetasizerNanoZSP通过动态光散射测定病毒粒子流体力学直径。

全自动核酸提取工作站：KingFisherFlex磁珠法平台完成96样本并行核酸纯化。

高通量测序平台：IlluminaNovaSeq6000系统每run可产出6Tb数据用于宏基因组分析。

生物分子相互作用仪：BiacoreT200通过表面等离子共振实时监测抗原抗体结合动力学。

全自动电泳成像系统：Bio-RadChemiDocMP支持化学发光与荧光双模式信号采集。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。