向日葵白锈病菌检疫检测

检测项目

孢子囊形态观测、游动孢子活性测定、卵孢子分离鉴定、寄主范围测试、致病性验证实验、ITS序列分析、COI基因扩增、β-tubulin基因测序、SSR分子标记筛查、脂肪酸甲酯谱分析、细胞壁水解酶活性测定、温度敏感性试验、湿度适应性评估、杀菌剂抗性监测、免疫胶体金试纸条开发、实时荧光定量PCR验证、LAMP快速检测体系建立、电子显微镜超微结构观察、离体叶片接种试验、田间病斑分级评价、种子带菌率统计、土壤残留孢子定量分析、病原菌分离纯化培养、菌丝生长速率测定、产孢量统计比较、寄主特异性识别实验、交叉接种致病性分析、抗病品种筛选试验、生物安全风险评估模型构建

检测范围

向日葵种子表皮样本、幼苗胚轴切片材料、成熟植株叶片病斑组织、茎秆维管束分离物、花盘髓部浸出液样本、根系分泌物提取物、土壤耕作层悬浮液样本、灌溉水过滤沉淀物、农用器械表面拭子样本、包装材料微生物附着物储存库样品运输介质残留物实验室培养皿分离菌株冷冻干燥保存菌种石蜡切片标本电子显微镜固定样品DNA提取纯化产物RNA反转录模板蛋白质电泳样本酶联免疫反应板硝酸纤维素膜点样标本PCR扩增产物测序文库构建样本离心管沉淀物滤膜富集物培养基平板菌落

检测方法

1.光学显微观测法：采用棉蓝乳酚油染色技术对病斑组织进行透明化处理，在400油镜下测量孢子囊形态参数（直径/长宽比/表面纹饰），依据国际菌物分类标准进行形态学鉴定。

2.分子指纹图谱法：通过CTAB法提取病原菌基因组DNA，使用引物ITS4/ITS5扩增核糖体内转录间隔区序列，经琼脂糖凝胶电泳验证后提交至GenBank进行BLASTn比对。

3.生物测定法：采用离体叶片针刺接种技术，将纯化菌株悬浮液（浓度110⁵sporangia/mL）定量接种于感病品种叶背，在20℃饱和湿度条件下观察7天内的病斑扩展情况。

4.免疫层析法：基于单克隆抗体开发侧向流动试纸条，可现场快速检测种子表面携带的病原菌特异性抗原蛋白，检出限达50sporangia/seed。

5.实时荧光定量PCR：设计TaqMan探针靶向病原菌特有的效应蛋白基因PSE1，建立标准曲线实现孢子囊绝对定量分析，动态范围覆盖10-10⁶copies/μL。

检测标准

GB/T28068-2011向日葵检疫鉴定方法SN/T4283.2-2015植物病原卵菌检疫鉴定规程ISO17075:2017植物检疫-分子检测方法验证指南EPPOPM7/98(2)Albugotragopogonis诊断协议USDAAPHISPPQProtocolID-463真菌检疫程序GB/T36843-2018植物病原菌分子标记检测通则NY/T401-2000种子产地检疫规程ISPMNo.27限定性有害生物诊断规程ISO/IEC17025:2017检测实验室能力通用要求GB15569-2009农业植物检疫实验室安全规范

检测仪器

1.全自动显微成像系统：配备微分干涉对比（DIC）模块和图像分析软件，实现孢子囊三维结构重建与形态参数自动测量。

2.实时荧光定量PCR仪：配置多通道光学检测模块，支持TaqMan探针与SYBRGreen双染料系统运行。

3.超速冷冻离心机：配备角转子和水平转子，满足DNA提取过程中不同转速（12,000-100,000g）的分离需求。

4.全波长酶标仪：集成紫外/可见光/荧光检测功能，可完成ELISA实验的吸光度读取与数据分析。

5.可控环境培养箱：具备精确温控（0.5℃）和湿度调节功能（RH30-95%），满足病原菌培养条件标准化要求。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。