苯酚氯仿提取rna检测

检测项目

RNA浓度测定：紫外分光光度法测量提取物在260nm波长处的吸光值，定量范围1-2000ng/μL，检测限0.5ng/μL

A260/A280比值检测：评估蛋白质污染程度，合格标准1.8-2.0，精度误差±0.05

A260/A230比值检测：检测有机溶剂残留，合格区间2.0-2.4，分辨率0.01单位

电泳完整性分析：采用1%琼脂糖凝胶电泳，28S/18S rRNA条带比值≥1.8判定完整，迁移电压100V

基因组DNA残留量：DNase I消化后PCR扩增，检测限≤0.01%总核酸

内毒素含量：鲎试剂法定量，医学应用要求≤0.25EU/μg

RNA酶活性检测：以荧光底物法测定水解速率，活性阈值≤0.1U/mg

苯酚残留量：比色法检测4-氨基安替比林衍生物，限量≤0.1% v/v

氯仿残留检测：气相色谱法分析，检出限10ppm

回收率验证：加标标准RNA样本，计算提取效率≥85%

pH值测定：电极法检测溶解液酸碱度，控制范围7.0-7.8

氧化损伤检测：8-羟基脱氧鸟苷含量分析，HPLC法测定限0.1nmol/mg

检测范围

哺乳动物组织标本：肝脏/脑组织等富含RNase样本，需快速低温处理

植物多糖多酚样本：如松树针叶、葡萄果实等，需特殊吸附柱纯化

血液及体液样本：全血/血清中游离RNA，起始量≥200μL

微生物菌体：酵母/大肠杆菌等，需溶菌酶破壁预处理

细胞培养物：贴壁/悬浮细胞，建议106细胞量级提取

法医生物检材：毛发/唾液斑痕等微量样本，适用磁珠富集法

石蜡包埋组织：需二甲苯脱蜡及蛋白酶K消化

转基因生物材料：外源基因表达量验证样本

环境微生物群落：土壤/水体滤膜样本，含腐殖酸干扰

古生物化石：骨骼/牙齿等降解样本，需片段化分析

病毒颗粒分离物：包膜病毒需Triton X-100裂解

外泌体RNA：超速离心分离后提取，体积≥500μL

检测标准

ISO 20391-1:2018 细胞计数方法学—RNA完整性校准规范

GB/T 34797-2017 核酸提取纯化试剂盒质量要求

CLSI MM19-A2 分子诊断样本制备指南

ASTM E3133-18 核酸纯度分光光度测定标准

YY/T 1256-2025 体外诊断试剂RNA保存液行业标准

GB/T 37874-2019 基因检测样本质量评价通则

ISO 20184-1:2020 冷冻组织RNA提取流程规范

EP 7.0 欧洲药典核酸原料药杂质控制要求

ICH Q5B 生物制品残留DNA检测指导原则

AOAC 2021.09 食品微生物RNA提取验证方法

检测仪器

紫外可见分光光度计：配备微量比色皿，测量波长190-800nm，执行A260/A280纯度分析

微孔板荧光计：96孔板高通量检测，激发/发射波长485/535nm，用于RNA定量试剂盒读取

毛细管电泳仪：Agilent 2100平台，RNA完整性值(RIN)算法，分辨率3-5000nt

冷冻离心机：配备角转子，最大转速20000×g，实现相分离操作

恒温核酸提取仪：温控范围4-100℃，支持磁珠法自动化纯化

梯度PCR仪：96孔模块，温度均一性±0.3℃，用于DNA残留验证

超微量核酸分析仪：0.5μL样本检测，集成SDS-PAGE模拟分析软件

气相色谱质谱联用仪：DB-624色谱柱，检测有机溶剂残留

恒温金属浴：控温精度±0.5℃，用于样本裂解孵育

超纯水系统：18.2MΩ·cm水质，确保无RNA酶污染

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。