实验室支原体检测

检测项目

核酸扩增检测：采用荧光定量PCR技术，检测限达10拷贝/μL，覆盖16S rRNA保守区域特异性引物设计

选择性培养基培养法：使用SP-4琼脂基质，37℃厌氧培养28天，灵敏度0.1CFU/mL

DNA荧光染色鉴定：应用Hoechst 33342染色剂，荧光显微镜400×镜下观察特征性丝状结构

生化代谢试验：检测精氨酸脱羧酶活性，培养液pH值变化范围0.5-1.2单位

电镜形态学确认：扫描电镜5000-10000倍率下观测直径0.2-0.3μm的煎蛋状菌落

抗生素敏感性试验：测试四环素类/大环内酯类药物，MIC值测定范围0.01-128μg/mL

细胞共培养法：Vero细胞系传代3代，14天观测CPE病变，阳性对照设立标准

代谢活性检测：采用Alamar Blue还原法，570nm/600nm双波长吸光度差值≥0.3判为阳性

免疫荧光检测：抗肺炎支原体单克隆抗体标记，488nm激发波长下显色判定

膜蛋白印迹分析：检测P1黏附蛋白表达，42kDa特征条带确认

气液相色谱法：分析菌体脂肪酸谱，C14:0特征峰保留时间10.8±0.2min

酶联免疫吸附试验：包被纯化MP229抗原，OD450nm临界值0.15判定标准

检测范围

细胞治疗产品：干细胞制剂、CAR-T细胞悬液等活细胞治疗物质的污染筛查

病毒疫苗生产：流感疫苗、轮状病毒疫苗等病毒培养过程中的无菌监控

单克隆抗体：杂交瘤细胞培养上清及纯化抗体的生物负载检测

生物反应器培养物：哺乳动物细胞大规模培养的定期过程控制样品

胎牛血清制品：细胞培养用血清原料的支原体灭活验证试验

医疗器械植入物：骨科生物材料、组织工程支架等三类医疗器械

基因治疗载体：重组腺相关病毒、慢病毒等载体生产终端样品

诊断试剂组分：免疫层析试纸条包被原液、酶标记物等生物原料

细胞库资源：主细胞库(MCB)、工作细胞库(WCB)的定期检定

生物安全柜验证：A2级生物安全柜工作区域的环境监控样品

培养基组分：无血清培养基关键添加物如转铁蛋白的质量控制

医用胶原产品：创面修复用动物源胶原蛋白萃取物

检测标准

欧洲药典EP 2.6.7：细胞基质产品支原体检测的金标准方法

美国药典USP<63>：涵盖核酸扩增与培养法的验证要求

ISO 17025：微生物检测实验室通用技术要求

GB/T 41891-2022：细胞治疗产品支原体检查法

JP XVII 4.06：日本药典规定培养法检测流程

CP 2020 1101：中国药典无菌检查法补充要求

FDA Points to Consider：生物制品病毒清除验证指南

GB/T 19973.1-2015：医疗器械灭菌微生物学方法

EP 5.2.8：疫苗生产中支原体检测特殊规定

ISO 11737-2：医疗器械微生物污染水平测定

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：搭载FAM/HEX双通道检测模块，实现95℃-55℃梯度退火，用于支原体特异性DNA片段扩增及定量分析

厌氧培养工作站：维持O<0.1%、CO<5%环境，集成温湿度传感器，满足28天持续培养要求

倒置荧光显微镜：配备DAPI/GFP双滤镜系统，400×物镜分辨率支持菌体形态学鉴定

酶标仪：96孔板光谱扫描功能，支持450nm/570nm/600nm多波长读取，完成代谢活性检测

生物安全柜：A2级层流防护系统，HEPA滤器效率99.99%，保障活菌操作安全性

电化学分析仪：PH/溶氧三电极系统，实时监测培养液代谢参数变化

凝胶成像系统：CCD冷却至-30℃，紫外透照台检测核酸电泳条带

微生物比浊仪：0.5-5.0 McFarland标准管校准，菌液浓度定量控制

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。