细胞rna提取检测

检测项目

总RNA浓度测定：紫外分光光度法检测A260值，测量范围0.2-1000ng/μl，检测限0.1ng/μl

纯度分析：A260/A280比值检测，合格标准1.8-2.1；A260/A230比值检测，合格标准2.0-2.2

完整性检测：RNA完整性系数（RIN值）分析，Agilent Bioanalyzer系统评估，范围1-10

基因组DNA残留：qPCR法检测管家基因Ct值，残留标准≤0.01%

内毒素水平：鲎试剂法检测，医学应用要求≤0.25EU/μg

蛋白质污染：BCA法测定，合格标准≤0.1μg/μg RNA

核酸酶活性检测：荧光底物降解试验，灵敏度0.001U/μl

电泳图谱分析：非变性琼脂糖凝胶电泳，28S/18S比值≥1.8

反转录效率验证：spike-in对照基因检测，效率要求≥95%

微生物污染检测：16S rRNA PCR扩增，电泳无杂带

RNA甲基化水平：m6A ELISA检测，检测限0.01ng

亚细胞定位RNA纯度：细胞器分离后线粒体RNA占比检测

检测范围

哺乳动物细胞系：HEK293、HeLa等贴壁/悬浮培养细胞，需控制传代次数

原代细胞分离物：肝细胞、神经元等新鲜分离样本，离体时间≤2h

临床组织样本：手术切除的肿瘤/病变组织，需液氮速冻保存

血液成分：全血、PBMC、血清/血浆cfRNA，采集后6h内处理

植物组织：拟南芥叶片、水稻根尖等，需去除多糖干扰

微生物样本：细菌/酵母菌体，裂解需优化溶菌酶浓度

法医物证样本：毛发毛囊、陈旧血痕等微量样本

石蜡包埋组织：FFPE样本需特殊脱蜡处理

单细胞悬液：流式分选后单个细胞RNA扩增

外泌体RNA：超速离心分离的exosome提取物

古生物样本：化石组织特殊降解RNA处理

环境样本：土壤/水体微生物总RNA提取

检测标准

ISO 20395-1:2019 分子生物学分析用核酸定量要求

GB/T 37868-2019 RNA纯度检测紫外分光光度法

CLSI MM19-A2 分子诊断标本质量控制指南

ISO 20184-1:2018 FFPE样本RNA检测规范

GB/T 34797-2017 微量RNA提取与检测

ASTM E2186-02a 核酸样品完整性评估标准

ISO 20166-3:2018 诊断用RNA测序前处理流程

GB/T 38576-2020 人类血液样本RNA保存规范

EN ISO 15225:2016 医疗器械相关RNA检测

GB/T 30989-2014 高通量测序用RNA质量要求

检测仪器

Nanodrop OneC紫外分光光度计：1μL微量检测，波长范围190-840nm，自动计算A260/A280比值

Agilent 4200 TapeStation系统：自动化电泳分析，RIN值算法符合ISO标准

Qubit 4.0荧光计：RNA高灵敏度定量，检测范围1-1000ng，采用RNA特异性荧光染料

Covaris M220聚焦超声仪：实现组织样本非接触式均质化，防止RNA降解

Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪：基因组DNA残留检测，支持HRM分析

Beckman Coulter Optima超速离心机：100,000g离心能力，用于外泌体RNA分离

Miltenyi gentleMACS解离仪：机械破碎组织样本，程序化控制裂解强度

Thermo KingFisher Flex磁珠纯化系统：自动化提取流程，避免人为RNase污染

Illumina NovaSeq 6000测序仪：RNA完整性验证，支持全转录组分析

Leica CM1950冷冻切片机：-30℃低温操作，制备未固定组织切片

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。