GLUT4转运蛋白免疫印迹检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-07-10  

GLUT4转运蛋白免疫印迹检测是一种专业分子生物学方法,用于定量分析葡萄糖转运蛋白4的表达水平。检测要点包括蛋白样品制备标准化、SDS-PAGE分离精度、一抗结合特异性验证、信号检测灵敏度控制以及数据分析重现性评估,确保结果可靠性和生物学意义。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

蛋白样品制备质量评估:检测裂解液均一性和杂质去除,参数包括蛋白溶解度95%以上,离心速度12000rpm。

SDS-PAGE凝胶电泳分离:基于分子量分离蛋白,参数包括丙烯酰胺浓度10-12%,电压恒定150V,时间60min。

蛋白转移效率检测:评估从凝胶到膜上的转移效果,参数包括转膜时间90min,电流0.3A,转移率不低于90%。

一抗结合特异性验证:确认抗体对GLUT4的靶向性,参数包括稀释比例1:1000,孵育温度4°C,时间120min。

二抗信号放大效率:增强检测信号,参数包括HRP偶联二抗稀释1:5000,室温孵育60min,信号强度线性范围。

化学发光信号检测:捕获蛋白表达信号,参数包括ECL试剂灵敏度0.1ng,曝光时间1-5min,动态范围广。

灰度分析定量:通过软件计算条带强度,参数包括灰度值归一化,CV小于8%,输出相对表达量。

内参蛋白校准:使用beta-actin标准化,参数包括表达稳定性CV小于5%,校准偏差低于10%。

背景噪音控制:最小化非特异结合,参数包括封闭液5%脱脂奶粉,封闭时间60min,背景值低于5%。

检测灵敏度测试:确定最低检出限,参数包括稀释系列检测,LOD为0.05ng。

重现性评估:验证检测批次一致性,参数包括批内变异系数小于10%,批间偏差低于15%。

膜质控检查:确保PVDF膜完整性,参数包括膜孔径0.45μm,蛋白结合率高于95%。

检测范围

肌肉组织样本:如骨骼肌或心肌活检,用于研究GLUT4在运动或疾病中的调节机制。

脂肪细胞培养物:包括3T3-L1前脂肪细胞分化样本,评估胰岛素敏感性和糖摄取功能。

肝脏组织匀浆:来自啮齿类或人类肝脏,分析GLUT4在肝糖代谢中的表达变化。

糖尿病模型动物样本:如db/db小鼠或ZDF大鼠血清和组织,用于病理机制探索。

细胞系裂解液:HEK293或C2C12细胞株,研究基因过表达或敲除对GLUT4的影响。

临床活检标本:人类皮下脂肪或肌肉组织,支持糖尿病诊断和生物标志物验证。

药物处理样本:胰岛素或二甲双胍处理细胞,评价药物对GLUT4转运的调控效果。

基因编辑模型:CRISPR/Cas9编辑的GLUT4敲除组织,用于功能缺失研究。

植物转基因样本:如水稻或烟草工程化组织,探索GLUT4类似蛋白在作物中的应用。

生物体液样本:血浆或血清,监测循环中GLUT4相关标志物水平。

微生物发酵产物:酵母或细菌表达系统,验证重组GLUT4蛋白纯度。

神经组织样本:脑或神经元细胞,研究GLUT4在神经代谢中的作用。

检测标准

ASTM E2857-11:Western blot检测的标准指南,规范实验步骤和质控要求。

ISO 10993-18:2020:生物相容性评价,应用于样本处理和生物安全控制。

GB/T 16886.10-2017:医疗器械生物学评价标准,指导实验室废弃物管理。

ISO 17025:2017:检测和校准实验室能力要求,确保方法验证和人员资质。

GB/T 27405-2008:实验室质量控制规范,覆盖数据分析误差控制。

ISO 15189:2012:医学实验室质量和能力要求,适用于临床样本检测。

GB/T 33270-2016:生物样本处理通用准则,规定储存和运输条件。

ASTM E2536-14:蛋白免疫检测方法学标准,强调抗体验证流程。

ISO 13485:2016:医疗设备质量管理,用于仪器校准维护。

GB/T 19001-2016:质量管理体系要求,支持全过程标准化。

检测仪器

垂直电泳系统:用于SDS-PAGE分离蛋白,功能包括凝胶灌制和电泳运行,确保分子量分辨率。

半干转膜仪:将蛋白从凝胶转移到PVDF膜,功能包括恒流转膜,提高转移效率和一致性。

化学发光成像系统:捕获和量化信号,功能包括高灵敏度CCD检测,支持灰度分析。

微量分光光度计:测定蛋白浓度,功能包括UV-Vis光谱测量,保证样品均一性。

高速离心机:用于样品前处理,功能包括高速离心得上清液,去除细胞碎片。

恒温摇床:进行抗体孵育,功能包括温度和转速控制,优化结合反应。

电泳电源:提供稳定电压电流,功能包括可编程参数设置,确保电泳重现性。

膜封闭工作站:处理膜封闭和洗涤,功能包括自动缓冲液更换,减少人为误差。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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