实时荧光PCR分析仪检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-07-28  

实时荧光PCR分析仪检测是一种基于荧光探针技术的分子诊断方法,用于实时监测核酸扩增过程。该技术聚焦于扩增效率、信号阈值设定和特异性分析,广泛应用于病原体检测和基因定量。检测要点包括扩增曲线解析、熔解温度测定及定量标准曲线建立。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

扩增曲线分析:监测PCR反应的动态过程;具体检测参数包括扩增效率(90%-110%)、斜率(-3.5至-3.1)、R²值(≥0.98)。

阈值循环数检测:确定荧光信号超过预设阈值的循环数;具体检测参数包括Ct值范围(10-40循环)、阈值设定(背景荧光+10标准差)。

荧光信号强度测量:量化探针发射的荧光强度;具体检测参数包括荧光单位(FU,范围100-10000)、背景校正因子(≤5%)。

熔解曲线分析:评估扩增产物的特异性和纯度;具体检测参数包括熔解温度(Tm,精度±0.5°C)、峰形一致性(半峰宽≤1°C)。

扩增特异性评估:确认目标序列的正确扩增;具体检测参数包括非特异性扩增指数(≤0.1)、引物二聚体检测(荧光增量<5%)。

定量标准曲线建立:用于绝对定量分析;具体检测参数包括标准曲线斜率(-3.0至-3.5)、线性范围(10^2-10^8拷贝/μL)、截距误差(±5%)。

检测限确定:识别最低可检出浓度;具体检测参数包括LOD值(95%置信度)、稀释系列验证(10倍梯度)。

重复性测试:评估检测结果的稳定性;具体检测参数包括变异系数(CV%,≤5%)、重复次数(≥3次)。

交叉污染监测:防止样本间核酸污染;具体检测参数包括阴性对照信号(Ct值≥40)、气溶胶控制指标(<0.1%污染率)。

仪器校准验证:确保设备性能准确性;具体检测参数包括校准因子(1.0±0.05)、温度均匀性(±0.3°C)。

背景噪声控制:优化信号信噪比;具体检测参数包括噪声水平(<100FU)、基线漂移(≤2%)。

多通道同步检测:支持多重PCR分析;具体检测参数包括通道间干扰(<5%)、荧光光谱分离度(≥20nm)。

检测范围

病毒核酸检测:用于呼吸道病毒如流感病毒、SARS-CoV-2的定性定量分析。

细菌病原体检测:针对食源性或临床样本中的大肠杆菌、沙门氏菌等病原微生物。

真菌感染筛查:识别念珠菌、曲霉菌等真菌性感染病原。

寄生虫病诊断:检测疟原虫、弓形虫等寄生虫核酸序列。

基因表达分析:研究细胞或组织中特定基因的转录水平变化。

遗传病筛查:针对囊性纤维化、镰状细胞病等遗传变异检测。

食品安全监控:检测食品样本中的食源性病原体或污染物。

环境微生物监测:分析水样、土壤中的微生物群落结构。

法医DNA鉴定:用于个体身份识别或亲缘关系验证。

转基因生物检测:筛查农作物或产品中的转基因成分。

肿瘤标志物分析:量化癌症相关基因的表达水平。

药物耐药性测试:评估病原体对抗生素的基因型耐药性。

检测标准

ISO17025:2017检测实验室能力通用要求。

GB/T27403-2008实验室质量控制规范分子生物学检测部分。

ISO22174:2005食品微生物检测PCR方法通用指南。

ASTME2148-16实时荧光PCR技术标准实践规范。

GB/T34799-2017核酸检测技术通用要求。

ISO17822:2020体外诊断试剂性能评价标准。

GB/T37870-2019生物样本核酸提取与纯化规范。

检测仪器

实时荧光PCR分析仪:核心设备,执行温度循环和荧光信号采集;在本检测中功能包括扩增曲线生成、Ct值计算、多通道同步监测。

微量分光光度计:用于核酸浓度和纯度测量;在本检测中功能包括样本定量、A260/A280比值测定、稀释因子校准。

核酸提取仪:自动化处理样本以纯化核酸;在本检测中功能包括裂解效率优化、杂质去除、回收率验证。

荧光定量PCR板读取器:专用于多孔板荧光检测;在本检测中功能包括高通量信号采集、熔解曲线分析、数据实时传输。

数据分析软件:处理PCR原始数据;在本检测中功能包括曲线拟合、标准曲线建立、结果报告生成。

温控模块校准器:验证温度准确性;在本检测中功能包括热盖温度校准、孔间温度均匀性测试。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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