CCK-8增殖毒性同步测试检测

检测项目

细胞增殖率：反映受试物作用后细胞的相对增殖能力，以对照组细胞增殖活性为基准计算。计算方式：（受试组平均OD值/对照组平均OD值）×100%，结果保留小数点后两位，重复性试验变异系数≤8%。

半数抑制浓度（IC50）：受试物对细胞增殖产生50%抑制作用时的浓度，是评估受试物毒性强度的关键指标。计算方法：采用非线性回归模型（如Logit-Probit模型）拟合剂量-效应曲线，置信区间设定为95%，结果保留三位有效数字，重复性误差≤5%。

细胞存活率：受试物作用后存活细胞占初始接种细胞的比例，反映细胞的存活状态。计算方式：（受试组活细胞数/初始接种细胞数）×100%，活细胞数通过台盼蓝排斥法检测，计数误差≤10%。

最大效应浓度（Emax）：受试物对细胞增殖的最大抑制率，反映受试物的极限毒性作用。计算方法：通过S型曲线模型（Hill模型）拟合剂量-效应关系获得，以百分比表示，误差范围±5%。

时效曲线分析：记录受试物在不同作用时间（24h、48h、72h）下的细胞增殖率变化，反映毒性作用的时间依赖性。时间点设置不少于3个，每个时间点设置3个复孔，结果以均值±标准差表示。

剂量-效应关系拟合：通过不同浓度受试物（通常设置5-7个浓度梯度）作用后的细胞增殖率，拟合剂量与效应之间的数学关系。拟合模型要求决定系数（R²）≥0.90，确保模型对数据的解释能力。

空白对照吸光度值：未接种细胞的培养液与CCK-8试剂反应后的吸光度值，用于扣除背景干扰。检测要求：空白对照OD值≤0.15，若超过则需重新制备样品。

阳性对照抑制率：采用已知细胞毒性物质（如顺铂，浓度为10μM）作为阳性对照，检测其对细胞增殖的抑制率。要求：阳性对照抑制率≥80%，以验证试验体系的有效性。

细胞接种密度优化：检测不同接种密度（1×10³、5×10³、1×10⁴cells/孔）下的细胞增殖率，确定最佳接种密度。优化标准：接种后24h细胞汇合度≥70%，且CCK-8反应后OD值在0.8-2.0之间。

复孔变异系数：同一浓度受试物设置的3个复孔OD值的变异程度，反映试验的重复性。要求：复孔变异系数≤10%，若超过则需重新检测该浓度样品。

检测范围

药物候选化合物：小分子化学药物、生物制品（如单克隆抗体、重组蛋白）等，评估其对靶细胞（如肿瘤细胞）或正常细胞（如肝细胞）的增殖抑制作用，为药物临床前安全性评价提供依据。

化妆品原料：防腐剂（如甲基异噻唑啉酮）、美白成分（如维生素C衍生物）、防晒剂（如甲氧基肉桂酸乙基己酯）等，检测其对皮肤角质形成细胞或成纤维细胞的毒性，符合《化妆品安全技术规范》要求。

食品添加剂：甜味剂（如三氯蔗糖）、防腐剂（如脱氢乙酸钠）、色素（如日落黄）等，评价其对肠道上皮细胞（如Caco-2细胞）或肝细胞（如HepG2细胞）的增殖毒性，保障食品食用安全性。

医疗器械材料：植入性材料（如钛合金、聚乳酸）浸提液、医用敷料（如透明质酸创面贴）、输液器管材等，评估其对细胞的体外毒性，符合医疗器械生物学评价标准（GB/T16886）。

环境污染物：重金属离子（如铅、镉）、有机污染物（如多环芳烃、邻苯二甲酸酯）、农药残留（如草甘膦）等，检测其对水生生物细胞（如斑马鱼胚胎细胞）或人体细胞（如肺上皮细胞）的增殖抑制作用，研究环境污染物的毒性机制。

纳米材料：金属纳米颗粒（如金纳米颗粒、银纳米颗粒）、量子点（如镉硒量子点）、纳米纤维（如碳纳米管）等，评估其对细胞的增殖毒性，为纳米材料的生物安全性评价提供数据。

中药提取物：植物提取物（如银杏叶提取物、茶多酚）、中药饮片浸出液（如黄芪、当归）等，检测其对肿瘤细胞（如肝癌细胞HepG2）或正常细胞（如骨髓间充质干细胞）的增殖抑制作用，为中药药效及毒性研究提供依据。

生物毒素：细菌毒素（如大肠杆菌肠毒素、金黄色葡萄球菌肠毒素）、真菌毒素（如黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A）等，检测其对细胞的增殖抑制作用，为毒素毒性评价及食品安全防控提供支持。

化工原料：塑料添加剂（如增塑剂邻苯二甲酸二丁酯）、涂料成分（如环氧树脂）、胶粘剂（如聚氨酯胶）等，评价其对细胞的增殖毒性，保障工业材料的安全性。

农药及agrochemicals：除草剂（如草甘膦）、杀虫剂（如吡虫啉）、杀菌剂（如百菌清）等，检测其对非靶标生物细胞（如蜜蜂细胞、植物细胞）的增殖抑制作用，指导农药的安全使用。

生物制品辅料：疫苗佐剂（如铝hydroxide）、蛋白质药物载体（如脂质体）等，评估其对细胞的增殖毒性，保障生物制品的安全性。

检测标准

ISO10993-5:2017（医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验）：规定了医疗器械体外细胞毒性试验的一般要求，包括CCK-8法的试验步骤、结果评价及质量控制。

GB/T16886.5-2017（医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验）：等同采用ISO10993-5:2017，适用于我国医疗器械的体外细胞毒性评价。

ASTME1398-21（用CCK-8法测定细胞增殖的标准试验方法）：明确了CCK-8法的试验条件（如孵育时间、试剂浓度）、操作步骤及数据处理方法。

ISO21115:2020（化妆品体外细胞毒性试验荧光素二乙酸酯法和CCK-8法）：规定了化妆品原料及产品体外细胞毒性试验的CCK-8法应用要求，包括样品制备、试验浓度设置及结果判定。

GB/T30706-2014（纳米材料体外细胞毒性试验MTT法和CCK-8法）：适用于纳米材料的体外细胞毒性评价，规定了CCK-8法的试验参数（如纳米材料分散方法、孵育时间）及结果计算。

OECDTG492（体外细胞增殖毒性试验荧光素二乙酸酯法和CCK-8法）：经济合作与发展组织发布的试验指南，用于化学品的体外细胞毒性评价，包括CCK-8法的有效性验证及结果报告要求。

GB/T21769-2008（化学品体外细胞毒性试验急性毒性试验）：规定了化学品体外细胞毒性试验的一般原则，包括CCK-8法的试验设计及结果评价。

检测仪器

酶标仪：用于检测液体样品中特定波长（450nm）光吸收强度的仪器，具备多通道检测功能，检测范围0-4.0OD，分辨率0.001OD。在本检测中，测定CCK-8试剂与细胞反应后样品的吸光度值，通过吸光度定量细胞增殖活性，为计算细胞增殖率、IC50等指标提供数据。

二氧化碳培养箱：提供细胞培养所需恒温（37℃±0.5℃）、恒湿（≥95%）和恒定CO2浓度（5%±0.5%）环境的设备，具备温度和CO2浓度实时监测功能。在本检测中，维持细胞培养过程中的适宜环境，保证细胞正常生长及受试物作用的稳定性，避免环境因素（如温度波动）对试验结果的干扰。

细胞计数仪：采用图像分析或电阻抗法快速准确计数细胞数量的仪器，具备活细胞/死细胞区分功能，计数误差≤5%。在本检测中，检测细胞接种密度，确保每组样本细胞数量一致性（变异系数≤5%），为准确评估受试物毒性提供基础。

超净工作台：通过高效空气过滤器（HEPA）提供无菌操作环境的净化设备，洁净等级达到ISO5级，具备风速调节功能。在本检测中，用于细胞接种、受试物添加及CCK-8试剂处理等操作，避免细菌、真菌等污染，保证试验结果的准确性。

移液器：具备精确移取微量液体（1μL-10mL）功能的工具，分为单通道和多通道两种类型，体积误差≤1%。在本检测中，准确添加受试物（浓度误差≤2%）、CCK-8试剂（体积误差≤1%）及细胞悬液，保证试验剂量的准确性和重复性。

生物安全柜：用于处理生物样品的防护设备，具备空气过滤和负压保护功能，洁净等级达到ISO5级。在本检测中，处理具有潜在生物危害的细胞（如肿瘤细胞）或受试物（如细菌毒素、纳米材料），保护操作人员安全及样品不受污染。

倒置显微镜：用于观察细胞形态的显微镜，具备相差成像功能，放大倍数100-400倍。在本检测中，观察受试物作用后细胞的形态变化（如皱缩、脱落、细胞膜完整性破坏），辅助判断细胞毒性程度，补充定量检测（如吸光度）结果。

离心机：用于分离细胞或液体样品的设备，具备低速（0-5000rpm）离心功能，最大离心力5000×g。在本检测中，用于细胞悬液的制备（如离心收集细胞）及受试物的稀释（如离心去除未溶解的受试物颗粒），保证样品的均一性。

检测流程

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获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。