熔解曲线判读检测

检测项目

熔解温度（Tm值）测定：对PCR扩增产物的熔解温度进行量化，反映DNA双链的稳定性，测量范围50~95℃，温度精度±0.1℃。

熔解曲线形状分析：通过曲线的峰型（单峰、双峰、宽峰）判断产物的均一性，单峰表示产物单一，双峰提示杂合子或突变存在。

杂合子峰型识别：针对二倍体样本，识别杂合子特有的双峰或肩峰特征，判断基因型为杂合突变。

突变型与野生型峰面积比值计算：通过积分法计算突变型峰与野生型峰的面积比例，用于定量分析突变 allele 频率，计算误差≤5%。

产物均一性评估：通过熔解曲线的峰宽（半峰全宽）评估产物纯度，峰宽≤1.5℃表示产物均一性良好。

低丰度突变检测限：测定方法能检测到的最低突变比例，用于评估对罕见突变的检测能力，检测限≤1%（突变 allele 频率）。

引物二聚体识别：通过熔解温度差异识别引物二聚体，引物二聚体的熔解温度通常低于目标产物10~15℃。

扩增子长度验证：通过熔解曲线的Tm值与预期扩增子长度的相关性，验证产物是否符合设计要求，与预期值偏差≤2℃。

熔解曲线分辨率分析：评估曲线对不同Tm值产物的区分能力，温度间隔≤0.1℃/步时，可区分Tm差异≥0.5℃的产物。

温度梯度优化：对熔解曲线分析的温度范围进行优化，确定最佳升温速率（0.1~1℃/s）和温度梯度（50~95℃）。

检测范围

临床分子诊断样本：包括血液、组织、唾液等临床样本，用于检测患者样本中的基因突变。

遗传疾病筛查：针对地中海贫血、镰状细胞贫血等遗传疾病，进行SNP分型和突变验证。

肿瘤分子标志物检测：对EGFR、KRAS、BRAF等肿瘤相关基因的突变状态进行分析，指导靶向治疗。

传染病病原体分型：用于乙肝病毒、丙肝病毒等病原体的基因型分型，评估药物敏感性。

农业育种材料：对作物抗逆基因（如抗旱、抗虫基因）进行SNP分型，辅助育种筛选。

药物基因组学研究：检测CYP450家族基因（如CYP2D6、CYP3A4）的多态性，指导个体化用药。

法医DNA分析：对STR位点扩增产物进行熔解曲线验证，确保分型结果的准确性。

环境微生物监测：对污水、土壤中的病原菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）进行分型，评估环境安全。

生物制品质量控制：对疫苗毒株、重组蛋白表达载体的扩增产物进行均一性验证，确保产品质量。

转基因生物检测：对转基因作物中的外源基因（如Cry1Ab、CP4-EPSPS）进行熔解曲线分析，鉴定转基因成分。

检测标准

ISO 15189:2022 医学实验室质量和能力要求：规范熔解曲线判读检测的实验室管理与结果报告。

GB/T 20187-2006 核酸扩增检测技术要求：规定PCR扩增及熔解曲线分析的技术参数与质量控制。

ASTM E2106-05(2019) 熔解曲线分析用于SNP分型的标准方法：明确杂合子与纯合子的判读标准。

ISO 22753:2021 分子诊断中熔解曲线分析的性能验证：指导检测方法的灵敏度、特异性评估。

GB/T 30989-2014 基因分型技术规范：包含熔解曲线法在基因分型中的应用要求。

CLSI EP17-A2 低丰度突变检测性能评估：用于确定熔解曲线法检测低比例突变的能力。

IEC 61010-2-010:2013 实验室设备安全标准：规范熔解曲线分析仪器的电气安全要求。

GB/T 19495.5-2004 转基因生物检测 核酸定性PCR方法：涉及熔解曲线法对转基因成分的验证。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力的通用要求：指导熔解曲线检测的方法确认与结果溯源。

CLSI MM01-A3 分子诊断方法验证：包含熔解曲线判读的重复性、再现性评估。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：集成PCR扩增与熔解曲线分析功能，通过荧光染料（如SYBR Green）或探针监测信号变化，温度范围4~99℃，升温速率0.1~5℃/s。

熔解曲线分析软件：对实时荧光定量PCR仪采集的温度-荧光信号数据进行处理，支持峰识别、Tm值计算、峰面积积分，具备批量分析功能。

高精度温度循环系统：用于控制熔解曲线分析的温度梯度，确保温度变化的线性与稳定性，温度精度±0.05℃，温度均匀性±0.1℃。

多通道荧光检测器：配合实时荧光定量PCR仪使用，同时检测多个荧光通道（≥4个），用于多重熔解曲线分析，荧光检测限≤100 copies/μL。

数据采集与处理系统：实时记录温度与荧光信号，采样频率≥10次/秒，支持数据导出（如CSV、Excel格式），便于结果分析与存储。

荧光染料浓度校准仪：对SYBR Green等荧光染料的浓度进行定量，确保熔解曲线信号的一致性，浓度测量范围0.1~10μmol/L，精度±5%。

PCR产物纯度分析仪：通过紫外分光光度法或毛细管电泳法验证扩增产物的纯度，辅助熔解曲线均一性评估，纯度要求OD260/OD280≥1.8。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。