DNA甲基化焦磷酸测序检测

检测项目

CpG位点甲基化率：检测特定CpG位点的甲基化比例，反映该位点的表观遗传修饰状态，测量范围0~100%，精度±1%，支持单碱基分辨率分析。

基因组DNA甲基化水平：分析全基因组范围内的甲基化程度，评估整体表观遗传状态，检测下限0.1%甲基化率，覆盖≥90%基因组CpG位点。

特定基因启动子甲基化：针对目标基因启动子区域的CpG岛甲基化状态，分析其对基因表达的调控作用，分辨率单碱基，支持多基因同时检测。

甲基化位点拷贝数：定量甲基化位点的拷贝数变化，反映基因拷贝数变异与甲基化的关系，线性范围1~10^6拷贝/μL，R²≥0.99。

等位基因特异性甲基化：区分等位基因之间的甲基化差异，用于印记基因或杂合子样本分析，检测灵敏度0.1%等位基因比例。

甲基化模式分析：识别甲基化位点的分布模式（如连续甲基化、散在甲基化或簇状甲基化），支持多位点联合分析，输出甲基化模式图谱。

低甲基化区域检测：定位基因组中低甲基化的区域（如重复序列或转座子），分析其对基因组稳定性的影响，覆盖范围≥95%基因组CpG岛。

高甲基化基因筛选：筛选具有高甲基化特征的基因（如肿瘤抑制基因），用于肿瘤标志物发现，FDR校正后P值≤0.05，支持差异甲基化基因富集分析。

甲基化位点稳定性分析：评估甲基化位点在不同样本（如同一患者的不同组织或不同时间点样本）中的稳定性，变异系数≤5%，用于验证生物标志物的可靠性。

甲基化位点与表达相关性：分析甲基化位点与对应基因mRNA表达的相关性，揭示甲基化对基因表达的调控作用，Pearson相关系数≥0.8，支持线性回归分析。

检测范围

肿瘤组织样本：包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌等肿瘤组织的甲基化检测，用于肿瘤诊断、预后评估和治疗靶点筛选。

血液样本：外周血、血浆中的循环肿瘤DNA（ctDNA）甲基化检测，适用于液体活检，非侵入性监测肿瘤进展。

细胞系样本：体外培养的肿瘤细胞系（如A549、MCF-7）或正常细胞系的甲基化分析，用于机制研究和药物筛选。

组织芯片样本：多组织样本（如正常组织与肿瘤组织配对）的芯片化甲基化检测，支持高通量分析，适用于大规模临床研究。

唾液样本：唾液中的脱落细胞DNA甲基化检测，非侵入性检测方法，适用于人群筛查（如食管癌、胃癌风险评估）。

尿液样本：尿液中的脱落细胞DNA甲基化检测，用于泌尿系统疾病（如膀胱癌、肾癌）的诊断和监测。

脑脊液样本：脑脊液中的DNA甲基化检测，适用于神经系统肿瘤（如胶质瘤、脑膜瘤）的诊断和复发监测。

胚胎组织样本：胚胎或胎儿组织（如绒毛膜、羊水细胞）的甲基化检测，用于发育生物学研究（如胚胎发育过程中的表观遗传调控）。

植物组织样本：植物叶片、果实、种子等组织的甲基化分析，用于植物表观遗传研究（如逆境响应、品种改良）。

微生物样本：细菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）、真菌（如白色念珠菌）等微生物的甲基化检测，用于微生物分类、功能研究和耐药机制分析。

检测标准

ISO 15189:2022 医学实验室质量和能力要求，用于规范DNA甲基化焦磷酸测序实验室的质量控制和能力评估。

GB/T 38477-2020 高通量测序技术规程，规定了焦磷酸测序实验的样本处理、文库构建、测序运行等流程的技术要求。

ASTM E2107-19 焦磷酸测序法检测DNA甲基化的标准指南，提供了焦磷酸测序法检测DNA甲基化的实验设计、结果分析和质量保证的指导。

GB/T 35029-2018 DNA甲基化检测 焦磷酸测序法，国内行业标准，规定了焦磷酸测序法检测DNA甲基化的术语和定义、原理、试剂与材料、实验步骤等内容。

ISO 20397:2021 分子诊断学 焦磷酸测序法检测DNA甲基化的一般要求，适用于临床和科研领域的DNA甲基化焦磷酸测序检测。

CLIA 88 临床实验室改进修正案，用于临床样本DNA甲基化检测的合规性要求，确保检测结果的准确性和可靠性。

GB/T 21767-2008 食品中DNA甲基化检测方法，规定了食品中DNA甲基化的检测方法（包括焦磷酸测序法），适用于食品样本的表观遗传分析。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力的通用要求，用于DNA甲基化焦磷酸测序实验室的认可，确保实验室具备相应的能力。

GB/T 34796-2017 动物组织中DNA甲基化检测 焦磷酸测序法，规定了动物组织中DNA甲基化的焦磷酸测序检测方法，适用于动物医学研究和兽医诊断。

ASTM E2613-19 环境样本中DNA甲基化检测的标准方法，提供了环境样本（如土壤、水）中DNA甲基化检测的实验流程和质量控制要求。

检测仪器

焦磷酸测序仪：用于DNA甲基化的测序反应，通过检测焦磷酸释放信号实现定量分析，支持同时检测1-96个样本，读长≤500bp，测序精度≥99.9%，具备实时数据监控功能。

基因组DNA提取试剂盒：用于从样本（组织、血液、唾液等）中提取高质量基因组DNA，采用柱式纯化法，提取效率≥90%，DNA纯度（A260/A280）1.8~2.0，无RNA和蛋白质污染。

甲基化特异性PCR仪：用于扩增甲基化修饰的DNA片段（如经亚硫酸氢盐处理后的DNA），支持梯度PCR（温度范围40~95℃），温度精度±0.1℃，加热速率≥3℃/s，具备多重PCR功能。

荧光定量PCR仪：用于甲基化位点的定量分析（如MSP-qPCR），检测下限10 copies/μL，线性范围10~10^7 copies/μL，支持SYBR Green和TaqMan探针法，具备熔解曲线分析功能。

生物信息分析系统：用于甲基化数据的处理和分析，支持原始数据质控（如测序质量值过滤）、甲基化率计算、位点注释（如基因区域、CpG岛），输出甲基化率直方图、差异甲基化位点热图和相关性分析结果。

核酸定量仪：用于检测DNA样本的浓度和纯度，采用紫外分光光度法，检测范围2~1000ng/μL，精度±5%，支持微量样本（≥1μL）检测，具备数据存储和导出功能。

恒温孵育器：用于焦磷酸测序反应的恒温孵育（如测序前的模板制备），温度范围25~95℃，温度波动≤0.5℃，支持定时功能，具备超温报警功能。

高速离心机：用于样本的离心处理（如DNA提取中的细胞裂解、沉淀），最大转速15000rpm，最大相对离心力21130×g，支持角转子和水平转子，具备冷冻功能（-10~40℃）。

移液器：用于样本和试剂的准确移取，包括单道和多道移液器，量程1~1000μL，精度±1%（100μL以上），具备可调节容量和吸头弹出功能，符合ISO 8655标准。

超纯水仪：用于制备实验用超纯水（如试剂配制、样本稀释），采用反渗透和离子交换技术，电阻率≥18.2MΩ·cm（25℃），总有机碳（TOC）≤10ppb，支持连续供水，具备水质监测功能。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。