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饲料沙门氏菌荧光定量PCR检测
北检院检测中心 | 完成测试：次 | 2025-08-22
饲料沙门氏菌荧光定量PCR检测采用分子生物学技术，针对饲料样品进行高灵敏度定量分析。检测要点包括DNA提取效率评估、引物特异性验证、扩增动力学监测、阈值循环数测定及标准曲线建立。该方法确保准确识别沙门氏菌污染，保障饲料安全与动物健康。
注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
引物特异性检测：验证引物对沙门氏菌目标基因的特异性结合能力。具体检测参数包括引物序列同源性分析、非目标菌交叉反应测试。
探针设计优化：设计荧光标记探针用于实时信号检测。具体检测参数包括探针熔解温度测定、荧光淬灭效率评估。
DNA提取效率评估：测量从饲料基质中提取沙门氏菌DNA的回收率。具体检测参数包括提取试剂体积、离心速度与时间设置。
扩增曲线分析：实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化。具体检测参数包括荧光阈值设定、基线校正、扩增效率计算。
阈值循环数测定：确定目标DNA初始拷贝数的定量指标。具体检测参数包括Ct值范围分析、标准偏差控制。
标准曲线建立：用于定量目标菌浓度的参考模型。具体检测参数包括标准品浓度梯度设置、线性回归系数要求。
熔解曲线分析：验证扩增产物的特异性和纯度。具体检测参数包括熔解温度峰值、峰形一致性检查。
灵敏度测试：评估检测方法的最低检测限。具体检测参数包括稀释系列测试、检测下限值确定。
特异性测试：排除非目标细菌的干扰和假阳性。具体检测参数包括非目标菌株验证、交叉反应率计算。
重复性评估：确保检测结果的可重复性和稳定性。具体检测参数包括批内变异系数、批间差异分析。
阳性对照验证：使用已知阳性样品确认检测系统有效性。具体检测参数包括阳性对照Ct值范围、扩增曲线形态。
阴性对照监控：排除环境污染和假阳性风险。具体检测参数包括背景信号水平测量、无模板控制测试。
检测范围
家禽配合饲料：鸡、鸭等家禽使用的全价营养饲料产品。
猪浓缩饲料：猪只饲养中高蛋白和高能量饲料。
反刍动物饲料：牛、羊等反刍动物的草料和精料。
水产养殖饲料：鱼、虾等水产动物专用颗粒饲料。
宠物干粮：猫、狗等宠物食用的干燥配方饲料。
饲料原料：玉米、大豆粕等基础农作物原料。
饲料添加剂：维生素预混料、矿物质补充剂等营养强化成分。
预混饲料：营养均衡的混合饲料半成品。
有机饲料：无化学农药残留的天然饲料产品。
实验动物饲料：科研用标准化啮齿类动物饲料。
饲料成品：包装后销售的最终饲料商品。
饲料加工中间品：生产过程中的混合或粉碎半成品。
检测标准
检测标准
ISO 6579-1:2017 微生物学 食品和动物饲料中沙门氏菌检测 第1部分：定性检测方法。
GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验。
ISO 16140:2016 微生物学 方法验证协议。
GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测。
ISO 22174:2005 食品和饲料中病原体检测的分子方法 一般要求和定义。
GB/T 19495.2-2004 转基因植物及其产品检测 核酸定量PCR方法。
ASTM E1873-06 标准指南用于PCR方法的验证。
GB/T 28058-2011 分子生物学检测方法通则。
检测仪器
实时荧光定量PCR仪：用于实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化，功能包括温度循环控制、多通道荧光检测。
核酸自动提取仪：自动化处理样品中的DNA提取过程，功能包括裂解、结合、洗涤和洗脱步骤集成。
台式离心机：用于样品离心分离和沉淀收集，功能包括转速调节、定时操作及转子适配。
微量分光光度计：测量DNA浓度和纯度指标，功能包括紫外吸光度检测、浓度自动计算。
恒温混匀仪：用于样品混合和温育反应，功能包括温度精确控制、振荡速度调整。
生物安全柜：提供无菌操作环境防止污染，功能包括高效空气过滤、负压维持。
超低温冰箱：长期储存试剂和样品，功能包括温度稳定性控制、样品保护机制。
水浴锅：精确控制反应温度用于孵育，功能包括恒温加热、温度均匀分布。
检测流程
线上咨询或者拨打咨询电话;
获取样品信息和检测项目;
支付检测费用并签署委托书;
开展实验，获取相关数据资料;
出具检测报告。
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