小鼠基因表达丰度测定检测

检测项目

RNA提取纯度检测：通过紫外分光光度法测定RNA样本在260纳米和280纳米处的吸光度比值，评估样本中蛋白质或有机物污染程度，确保RNA纯度满足后续逆转录和扩增反应要求，避免杂质干扰定量结果。

RNA完整性评估：采用电泳或微流控技术分析RNA条带完整性，检查28S和18S核糖体RNA条带清晰度与比值，确认RNA无降解现象，保证基因表达丰度测定中模板质量可靠。

cDNA合成效率检测：通过对比逆转录反应前后RNA与cDNA的定量值，评估逆转录酶将mRNA转化为cDNA的转化率，确保cDNA模板量准确，为后续实时荧光定量PCR提供标准化基础。

实时荧光定量PCR分析：利用荧光染料或探针监测PCR扩增过程中荧光信号积累，动态测定基因扩增曲线，通过Ct值计算初始模板量，实现基因表达水平的绝对或相对定量。

数字PCR检测：将样本分割为数千个微反应单元进行独立PCR扩增，通过阳性反应单元计数直接计算目标基因拷贝数，无需标准曲线即可实现绝对定量，提高检测精准度。

微阵列基因表达分析：将标记的cDNA与固定于芯片上的探针杂交，通过扫描杂交信号强度同时检测数千个基因表达水平，适用于高通量筛选差异表达基因。

RNA测序丰度测定：通过高通量测序技术获取转录本序列信息，计算 reads 比对到基因区域的计数，基于标准化算法如TPM或FPKM定量基因表达丰度，提供全转录组覆盖。

内参基因稳定性验证：评估候选内参基因在不同实验条件下的表达稳定性，通过geNorm或BestKeeper算法选择变异系数最小的基因作为标准化参照，减少样本间误差。

引物特异性检测：通过熔解曲线分析或凝胶电泳验证引物扩增产物的单一性，确保无非特异性扩增或引物二聚体形成，保证qPCR结果特异性与准确性。

扩增曲线分析：监测PCR扩增过程中荧光信号随循环数的变化曲线，评估扩增效率、平台期和基线设置，识别异常扩增反应，优化定量循环阈值确定。

熔解曲线分析：在PCR结束后逐步升温并监测荧光信号变化，通过熔解峰形判断扩增产物的特异性与纯度，区分目标产物与非特异性产物，验证反应特异性。

标准曲线制备：使用系列稀释的标准品进行qPCR扩增，以Ct值对模板浓度对数作图生成标准曲线，用于未知样本的绝对定量或扩增效率校正。

检测范围

小鼠肝脏组织样本：来源于小鼠肝脏的RNA样本，常用于代谢相关基因表达研究，需确保组织取材快速、RNA保存完整以避免降解影响丰度测定准确性。

小鼠脑组织样本：包括皮层、海马等特定脑区组织，用于神经科学基因表达分析，样本异质性高，需精细解剖与均质化处理以保证代表性。

小鼠胚胎干细胞：多能性干细胞样本，应用于发育生物学研究，检测时需注意细胞状态一致性，避免分化影响基因表达背景值。

小鼠肿瘤模型组织：源自移植瘤或基因工程肿瘤模型的样本，用于癌基因或抑癌基因表达评估，需考虑肿瘤异质性与坏死区域对RNA质量的影响。

小鼠血液样本：全血或分离的血细胞样本，适用于免疫或循环生物标志物研究，需快速处理防止RNA酶降解，并去除基因组DNA干扰。

小鼠肌肉组织：骨骼肌或心肌组织样本，用于运动生理或疾病模型研究，组织纤维丰富，需优化裂解条件确保RNA提取效率。

小鼠肠道微生物组相关样本：肠道组织或内容物样本，研究宿主-微生物互作基因表达，需区分宿主与微生物RNA，避免交叉污染。

小鼠神经退行性疾病模型：如阿尔茨海默病模型脑组织，检测疾病相关基因表达变化，样本需匹配病理分期与对照组以减少偏差。

小鼠免疫细胞：分离自脾脏或淋巴结的淋巴细胞、巨噬细胞等，用于免疫应答基因研究，细胞纯度需通过流式分选验证以保证检测特异性。

小鼠转基因模型组织：特定基因过表达或敲除模型的组织样本，验证基因操作效果，需设计特异性引物区分内源与外源表达。

小鼠胚胎发育阶段样本：不同 gestation 天数的胚胎组织，研究发育动态表达谱，取样需精确计时并避免母体组织污染。

小鼠药物处理模型样本：经化合物处理的组织或细胞样本，评估药物对基因表达的影响，需设置溶剂对照组并控制处理时间一致性。

检测标准

ISO 20395:2019 生物技术-核酸定量方法要求：规定核酸定量分析中的方法验证、校准与控制要求，适用于基因表达检测中RNA与cDNA的定量准确性评估，确保数据可比性。

GB/T 37871-2019 生物样品中核酸提取纯化方法通则：中国国家标准规范生物样本RNA提取流程，包括样本保存、裂解条件与纯度指标，为小鼠组织RNA制备提供技术依据。

MIQE指南（最小信息 for 发表定量实时PCR实验）：国际共识标准，规定qPCR实验设计、操作与报告的最低要求，涵盖引物验证、内参选择与数据标准化，提升结果可靠性。

ISO 20166-1:2018 分子体外诊断检验-测序质量要求：针对RNA测序流程的质量控制标准，涉及文库构建、测序深度与比对率，确保基因表达丰度计算准确。

GB/T 30989-2014 逆转录酶活性检测方法：国家标准规范逆转录酶效率测试程序，用于评估cDNA合成质量，为表达检测提供模板制备依据。

ASTM E2935-2013 实时PCR数据解释指南：提供实时PCR数据分析和报告规范，包括基线设置、Ct值确定与统计学处理，减少分析主观性。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力通用要求：涵盖基因表达检测实验室的管理体系与技术能力要求，确保检测过程受控与结果可追溯。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：集成温控系统与光学检测模块，实现PCR扩增过程中荧光信号实时监测，通过检测荧光强度变化计算Ct值，用于基因表达相对或绝对定量分析。

分光光度计：利用紫外-可见光吸收原理测量核酸样本在特定波长下的吸光度值，快速评估RNA浓度与纯度，确保样本质量符合下游检测要求。

生物分析仪：基于微流控芯片技术自动化评估RNA完整性指数，通过电泳分离与荧光检测提供RNA质量分数，替代传统凝胶电泳进行样本质检。

微量离心机：提供高速离心力用于样本沉淀、试剂混合或相分离，在RNA提取与纯化步骤中加速液体分离，保证操作效率与一致性。

核酸提取仪：自动化执行样本裂解、结合、洗涤与洗脱步骤，采用磁珠或柱式法纯化RNA，减少人为误差，提高小鼠组织样本处理通量。

数字PCR系统：通过微滴或芯片分区技术将反应体系分割为纳升级单元，进行终点PCR检测，直接计数阳性分区实现无需标准曲线的绝对定量，提升精准度。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。