基因编辑效率检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-10-04  

基因编辑效率检测是评估基因编辑技术如CRISPR-Cas9系统在靶向编辑中准确性和有效性的关键过程,涉及对编辑位点的定量分析、脱靶效应的监测以及编辑产物的验证。检测要点包括使用高通量测序、PCR技术等方法,确保编辑结果的精确度和可重复性,为基因治疗和生物技术应用提供可靠数据支持。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

编辑效率计算:通过定量分析靶向编辑位点的成功修改比例,计算编辑效率百分比,评估基因编辑工具在特定细胞或组织中的有效性,确保数据准确反映编辑性能。

脱靶效应检测:监测基因编辑过程中非目标位点的意外修改,使用全基因组测序或特异性引物扩增方法,识别潜在脱靶事件,评估编辑工具的特异性。

插入/缺失分析:分析编辑后基因组中插入或缺失突变的发生频率和类型,通过测序数据比对,确定编辑产物的结构变化,验证编辑准确性。

等位基因频率测定:定量检测编辑后不同等位基因的分布比例,利用高通量测序或数字PCR技术,评估编辑对基因型多样性的影响。

细胞存活率评估:测量基因编辑处理后细胞的存活比例,通过细胞计数或荧光染色方法,确定编辑过程对细胞活力的影响。

编辑特异性验证:检验编辑工具是否仅针对预定靶点发挥作用,采用多重PCR或测序验证方法,确保编辑事件不涉及非相关区域。

基因表达水平检测:分析编辑后基因的转录活性变化,使用qRT-PCR或RNA测序技术,评估编辑对基因功能表达的潜在影响。

蛋白质功能分析:检测编辑后蛋白质的表达水平和活性,通过Western blot或酶活性测定,验证编辑是否导致功能异常。

基因组完整性检查:评估编辑过程中基因组是否发生大规模损伤,采用染色体核型分析或DNA断裂检测方法,确保编辑安全性。

编辑持久性监测:跟踪编辑效果在细胞分裂或长期培养中的稳定性,通过时间序列采样和测序分析,确定编辑的长期可靠性。

检测范围

人类体细胞:应用于基因治疗研究中的成纤维细胞或血细胞等,需检测编辑效率以确保治疗安全性和有效性,避免脱靶风险。

动物模型细胞:用于生物医学研究的鼠类或灵长类细胞,编辑效率检测支持疾病模型构建,验证基因功能研究结果。

植物细胞:涉及农作物改良的愈伤组织或原生质体,检测编辑效率评估育种效果,提高作物抗逆性或产量。

基因治疗载体:包括病毒载体如慢病毒或腺相关病毒,检测载体中介导的编辑效率,确保基因递送系统的可靠性。

微生物基因组:用于工业生物技术的细菌或酵母细胞,编辑效率检测优化代谢工程,提高产物合成效率。

干细胞系:应用于再生医学的多能干细胞,检测编辑效率支持分化研究,确保细胞治疗产品的质量。

器官类器官:三维培养的微型器官模型,编辑效率检测用于疾病模拟,验证药物筛选的准确性。

胚胎细胞:涉及生殖医学的早期发育细胞,检测编辑效率评估遗传修饰可行性,遵循伦理规范。

肿瘤细胞系:用于癌症研究的癌细胞,编辑效率检测支持致癌机制探索,提高靶向治疗研发效率。

转基因生物:包括基因编辑动物或植物,检测效率验证遗传性状稳定性,确保生物安全性评估。

检测标准

ISO 20395:2019 生物技术 - 基因编辑效率检测方法:规定了基因编辑效率的定量分析流程,包括样本处理、数据分析和报告要求,适用于多种细胞类型和编辑工具。

GB/T 39123-2020 基因编辑技术检测规范:中国国家标准,明确基因编辑效率检测的基本参数和实验条件,确保检测结果的可比性和可靠性。

ASTM E3096-2017 基因编辑产物验证标准指南:提供了编辑产物分析的通用框架,涵盖脱靶检测和效率计算,支持标准化数据报告。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力的通用要求:虽为通用标准,但适用于基因编辑检测实验室的质量控制,确保检测过程符合国际规范。

GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范:规定了检测实验室的管理要求,应用于基因编辑效率检测以保障数据准确性。

检测仪器

高通量测序仪:具备大规模并行测序能力的设备,可同时分析数百万个DNA片段,用于检测编辑位点和脱靶事件,提供全基因组水平的数据支持。

实时荧光定量PCR仪:通过荧光信号实时监测DNA扩增过程,定量分析编辑效率等位基因频率,确保检测灵敏度和精确度。

流式细胞仪:利用激光散射和荧光检测单个细胞特性,评估编辑后细胞存活率和表型变化,支持高通量筛选应用。

显微镜系统:集成高分辨率成像和图像分析功能,观察编辑后细胞形态和定位,辅助验证编辑效果的直观评估。

电泳设备:用于分离DNA或蛋白质片段,通过凝胶成像分析编辑产物大小和纯度,确保检测结果的可靠性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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