高通量测序验证

检测项目

文库浓度定量：采用荧光定量方法精确测定构建完成的测序文库浓度，确保上机测序的模板量符合平台要求，避免因浓度不当导致数据产出量异常或测序失败。

文库片段分布分析：通过微流控芯片或电泳技术评估文库片段的长度分布范围，确认插入片段大小符合预期，是保证测序读长有效利用和数据质量的重要前提。

簇密度优化与评估：对流动槽上生成的DNA簇进行成像分析，计算单位面积内的簇数目，确保簇密度处于仪器最佳工作区间，以避免信号交叉干扰或数据产出不足。

测序质量值分布评估：分析每个测序循环中碱基识别质量分数的分布情况，监控整个运行过程中信号强度的稳定性与碱基判读的可靠性。

碱基错误率统计：通过比对已知参考序列或使用内参标准品，计算测序数据的原始碱基替换、插入和缺失错误率，评估测序系统的原始准确性。

测序深度与覆盖度分析：统计目标区域的平均测序深度以及覆盖均一性，识别是否存在覆盖盲区或深度波动过大等问题，确保目标区域被充分且均匀地测序。

重复序列比例计算：鉴定并统计测序数据中因PCR扩增或测序偏好性产生的重复读长比例，评估文库复杂度和可能存在的扩增偏差。

比对率与比对质量评估：将测序读长与参考基因组进行比对，计算成功比对的读长比例及其比对质量得分，反映文库质量与参考序列的匹配程度。

GC含量一致性检验：分析测序数据中GC碱基的含量分布，并与理论值或预期分布进行比较，检测是否存在严重的GC偏好性测序偏差。

交叉污染监控：通过分析样品中是否含有预期外物种的序列或利用标签索引序列的分配情况，评估样品间是否存在交叉污染。

检测范围

全基因组测序验证：针对生物体全基因组DNA进行测序后的数据质量评估，重点验证基因组覆盖完整性、结构变异检测的灵敏度与特异性。

外显子组测序验证：对靶向捕获的外显子区域进行深度测序的数据质控，评估捕获效率、目标区域覆盖均匀度以及变异呼叫的准确性。

转录组测序验证：应用于RNA测序数据的质量监控，包括RNA完整性评估、链特异性验证、基因表达量定量的线性关系检验等。

单细胞测序验证：针对单细胞水平测序技术的特殊性质控，如细胞barcode分配效率、UMI标签利用率的评估以及批次效应的检测。

宏基因组测序验证：用于环境或宿主相关微生物群落测序数据的验证，包括物种组成分析的可靠性、污染物序列的识别与剔除效果评估。

染色质免疫共沉淀测序验证：对ChIP-seq实验产生的数据进行质控，包括抗体富集效率评估、背景噪声水平测定以及峰识别信噪比的验证。

长读长测序验证：针对第三代测序平台产生的长读长数据进行质量评估，如读长N50统计、一致性准确率计算以及结构变异检测能力的验证。

循环肿瘤DNA测序验证应用于液体活检中低频突变检测的测序数据验证，重点评估检测限、特异性以及背景错误率的控制水平。

表观遗传学测序验证：涵盖DNA甲基化、染色质可及性等测序数据的质控，包括转化效率验证、酶切效率评估以及甲基化水平定量的准确性检验。

病原体检测测序验证：针对临床样本中病原微生物检测的靶向或宏基因组测序数据，进行灵敏度、特异性以及物种鉴定分辨率的系统验证。

检测标准

ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力的通用要求

ISO20395:2019生物技术-用于检测核酸序列变异的下一代测序方法的要求和验证

GB/T30989-2014高通量基因测序技术规程

GB/T37872-2019靶向基因测序技术规程

GB/T34796-2017核酸定量测定方法通则

YY/T1723-2020下一代测序仪通用技术要求

CLSIMM09-A2基于核酸序列的微生物鉴定和分型方法；批准指南-第二版

TheSEQUENCEQualityControlConsortium(SEQC2)项目制定的基准研究方案与评价指标

TheAssociationofBiomolecularResourceFacilities(ABRF)下一代测序研究组制定的性能评价标准

检测仪器

荧光微量分光光度计：采用荧光染料特异性结合核酸的原理，对低浓度范围的文库样本进行精确定量，为准确控制上机模板量提供依据。

高通量自动化电泳系统：利用微流控芯片技术实现自动化电泳分析，快速提供文库片段大小分布的高分辨率数据，评估文库构建质量。

实时荧光定量PCR仪：通过监测PCR扩增过程中的荧光信号积累，对文库模板进行绝对定量，其高灵敏度适用于极低起始量的样本检测。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。