项目数量-9
周期蛋白降解动力学实验
北检院检测中心 | 完成测试：次 | 2025-12-30
周期蛋白降解动力学实验是研究细胞内周期蛋白稳定性与周转速率的关键技术。该实验通过精确控制蛋白质合成抑制条件，定时定量检测特定周期蛋白的丰度变化。核心要点包括样本同步化处理、时间点精确取样、蛋白质印迹定量分析以及降解曲线拟合。实验数据用于计算半衰期等动力学参数，揭示调控机制。
注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
细胞周期同步化处理：通过药物或血清饥饿等方法使细胞群体处于特定细胞周期时相，为后续降解动力学分析提供均一化的起始样本。
蛋白质合成抑制剂应用：使用放线菌酮等抑制剂阻断细胞内新生蛋白质的合成，确保观测到的蛋白丰度变化仅反映降解过程。
时间梯度样本采集：在抑制剂处理后于预设时间点系统性收集细胞样本，构建完整的时间序列用于动力学曲线绘制。
总蛋白质提取与定量：采用裂解液破碎细胞并提取总蛋白质，通过比色法精确测定各样本总蛋白浓度以确保上样量一致。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据目标周期蛋白分子量选择适宜浓度凝胶，实现复杂蛋白质混合物中目标蛋白的高分辨率分离。
蛋白质免疫印迹分析：将凝胶分离的蛋白质转移至膜上，利用特异性一抗识别并结合目标周期蛋白进行定性及半定量检测。
化学发光信号检测与成像：采用辣根过氧化物酶标记二抗与底物反应产生化学发光信号，通过成像系统捕获并数字化信号强度。
内参蛋白标准化校正：同步检测β-肌动蛋白或GAPDH等持家基因表达水平，对目标蛋白信号进行归一化处理以消除上样误差。
降解动力学曲线拟合：将标准化后的蛋白相对丰度与时间数据进行非线性回归分析，拟合指数衰减模型并获得降解速率常数。
蛋白质半衰期计算：根据拟合曲线的衰减常数计算周期蛋白丰度下降至初始值一半所需的时间，量化其稳定性特征。
蛋白酶体途径抑制验证：使用MG132等蛋白酶体抑制剂预处理细胞，观察周期蛋白降解是否被阻断以确认泛素-蛋白酶体途径的参与。
Cullin-RING连接酶活性评估: 通过检测特定E3连接酶的表达或活性变化,分析其对周期蛋白泛素化修饰及降解速率的调控作用.
检测范围
Cdk1激酶调节亚基Cyclin B1: 在有丝分裂中期向后期转换过程中被APC/C复合体靶向降解,其降解动力学直接影响染色体分离的正确性.
S期促进因子Cyclin A2: 在S期和G2期发挥关键作用,其适时降解是细胞进入有丝分裂的必要条件,异常滞留导致基因组不稳定.
检测流程
线上咨询或者拨打咨询电话;
获取样品信息和检测项目;
支付检测费用并签署委托书;
开展实验，获取相关数据资料;
出具检测报告。
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