蛋白质杂质测试

检测项目

宿主细胞蛋白残留：检测来源于表达系统（如CHO、E.coli）的非目标宿主蛋白，是生物制品安全性的关键指标。

宿主细胞DNA残留：定量分析产品中残留的宿主细胞基因组DNA片段，以评估潜在的致癌风险。

蛋白A残留：检测纯化过程中使用的Protein A亲和层析介质脱落配基，可能引起免疫反应。

内毒素：检测革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖，是强效热原，必须严格控制在限值内。

产品相关杂质（聚集体）：检测蛋白质的二聚体、多聚体及高分子量聚集体，影响产品药效和安全性。

产品相关杂质（片段）：检测因降解或酶切产生的目标蛋白片段，如轻链、重链或更小的肽段。

氧化/脱酰胺变体：检测蛋氨酸氧化、天冬酰胺脱酰胺等翻译后修饰变体，可能影响蛋白活性与稳定性。

电荷异质性：分析因糖基化、末端修饰或降解导致的电荷变异体，如酸性/碱性峰。

培养基成分残留：检测培养过程中添加的诱导剂、抗生素或生长因子等物质的残留。

下游工艺杂质：检测纯化过程中引入的杂质，如层析柱填料、去污剂、缓冲液成分等。

检测范围

治疗性单克隆抗体：包括曲妥珠单抗、阿达木单抗等，是蛋白质杂质测试最主要和最严格的应用领域。

重组治疗性蛋白：如胰岛素、促红细胞生成素、凝血因子等，需监控工艺相关和产品相关杂质。

疫苗（蛋白亚单位疫苗）：评估疫苗抗原的纯度，确保无宿主细胞成分及其他工艺杂质。

基因治疗载体：检测腺相关病毒或腺病毒载体生产过程中产生的宿主细胞蛋白和DNA残留。

细胞治疗产品：对培养上清或裂解液中的蛋白质杂质进行表征，确保终产品安全。

诊断用蛋白试剂：如酶联免疫试剂中的酶和抗体，高纯度是保证检测准确性和灵敏度的基础。

生物类似药：与原研药进行全面的杂质谱对比分析，是证明相似性的核心环节。

临床前与临床研究样品：在药物开发各阶段对候选药物进行杂质监控，支持安全性评价。

原料药与制剂：对原液和成品制剂均需进行杂质测试，确保从生产到使用的全程质量可控。

工艺开发与验证：用于评估和优化纯化工艺的去除杂质能力，并作为工艺验证的关键部分。

检测方法

酶联免疫吸附法：利用抗原-抗体特异性反应，高灵敏度定量检测HCP、Protein A等特定杂质。

高效液相色谱法：包括反相色谱、离子交换色谱和疏水相互作用色谱，用于分离和定量分析电荷变体、片段等。

尺寸排阻色谱法：基于分子大小分离，是分析蛋白质聚集体和片段的首选方法。

毛细管电泳法：包括CE-SDS和cIEF，分别用于高分辨率分析蛋白片段和电荷异质性。

质谱分析法：提供精确分子量信息，用于鉴定未知杂质、修饰位点及进行深度表征。

定量PCR法：高灵敏度、特异性定量检测残留宿主细胞DNA的金标准方法。

鲎试剂法：基于鲎血凝固原理，是检测内毒素含量最经典和常用的方法。

免疫印迹法：用于半定量检测特定宿主细胞蛋白或确认ELISA结果的特异性。

光散射法：如动态光散射和静态光散射，用于实时监测溶液中蛋白质聚集体的形成与大小分布。

肽图分析：通过酶切和LC-MS/MS分析，对蛋白质进行“指纹”鉴定和翻译后修饰定位。

检测仪器设备

酶标仪：用于读取ELISA实验的吸光度或荧光信号，实现高通量、自动化的杂质定量。

高效液相色谱仪：配备不同检测器（UV、荧光），是进行各类色谱分析的核心设备。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定蛋白质浓度及部分杂质的初步筛查。

毛细管电泳仪：实现高分辨率、自动化的蛋白质纯度与电荷异质性分析。

质谱仪：包括液相色谱-三重四极杆质谱和高分辨质谱，用于杂质的鉴定与定量。

实时荧光定量PCR仪：执行高灵敏度的残留DNA定量检测，数据准确可靠。

细菌内毒素检测仪/动态显色法鲎试剂仪：自动化进行内毒素测试，提高精度与效率。

化学发光成像系统：用于捕获和分析Western Blot的化学发光信号，进行杂质半定量分析。

动态光散射仪：快速、无损地测量蛋白质流体力学半径和聚集状态。

生物分析仪/蛋白质电泳系统：如Agilent Bioanalyzer或传统SDS-PAGE系统，用于快速评估蛋白质纯度与完整性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。