低聚核苷酸纯度检测

检测项目

全长序列含量：指目标序列长度的寡核苷酸占总样品的百分比，是衡量合成效率的关键指标。

缺失序列杂质：指在合成过程中因偶联失败而产生的比目标序列短的寡核苷酸片段。

截断序列杂质：与缺失序列类似，特指合成提前终止产生的短链杂质。

n-1杂质：指比目标全长序列少一个核苷酸的杂质，是合成中最常见的副产物之一。

n+1杂质：指比目标全长序列多一个核苷酸的杂质，通常由过量偶联或保护基未完全脱除导致。

碱基修饰程度：对于修饰型寡核苷酸，检测特定碱基（如甲基化胞嘧啶）的修饰是否完全及均一。

硫代磷酸酯键连接率：针对反义寡核苷酸等，检测磷酸骨架中硫代磷酸酯键（PS）替代磷酸二酯键（PO）的比例。

脱嘌呤产物：检测在合成或纯化过程中因不稳定而产生的腺嘌呤或鸟嘌呤脱除产物。

盐分与缓冲液成分：检测样品中残留的合成盐（如钠离子、铵离子）及纯化储存缓冲液成分。

有机溶剂残留：检测从合成或纯化步骤中残留的乙腈、三乙胺等有机溶剂含量。

检测范围

反义寡核苷酸：用于基因沉默治疗的药物，需严格监控全长序列和硫代修饰率。

siRNA双链：小干扰RNA，需分别检测正义链和反义链的纯度以及双链复合物的完整性。

PCR引物：用于聚合酶链式反应的短链寡核苷酸，对n-1等杂质敏感，影响扩增特异性。

测序引物：用于DNA测序的引物，要求高纯度以确保测序信号的准确性和读长。

荧光标记探针：如TaqMan探针、分子信标，需检测标记效率及未标记杂质。

适配体：具有特定三维结构的单链寡核苷酸，纯度影响其与靶标结合的特异性和亲和力。

CRISPR gRNA：用于基因编辑的向导RNA，其化学合成或体外转录产物的纯度至关重要。

基因合成片段：作为基因组装基础的长链寡核苷酸，纯度直接影响后续拼接的成功率。

修饰碱基寡核苷酸：含有锁核酸、吗啉代等特殊修饰的寡核苷酸，需评估修饰引入的均一性。

对照品与标准品：用于分析方法和质量体系验证的高纯度寡核苷酸参考物质。

检测方法

离子对反相高效液相色谱法：利用离子对试剂与寡核苷酸骨架相互作用，在反相柱上实现高分辨率分离，是纯度分析的金标准。

阴离子交换色谱法：基于寡核苷酸所带负电荷数的差异进行分离，特别适合分析长度相近的杂质。

毛细管凝胶电泳法：在高电场下于毛细管内的凝胶基质中进行分离，分辨率极高，能有效区分长度差异极小的片段。

质谱法：包括MALDI-TOF和ESI-MS，能提供精确分子量信息，直接鉴定全长产物和各类杂质的结构。

紫外-可见分光光度法：通过260nm处吸光度定量总寡核苷酸浓度，并通过A260/A280等比值初步判断纯度。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法：传统但有效的分离方法，可直观显示主带与杂质带，常用于快速筛查。

核磁共振波谱法：主要用于高级结构分析和特定化学修饰（如硫代）的定量确认，属于研究级方法。

酶切分析法：使用外切酶或内切酶处理样品，通过酶解产物的分析来推断末端完整性或修饰情况。

液相色谱-质谱联用法：将LC的高分离能力与MS的高鉴定能力结合，是进行复杂杂质谱分析的强大工具。

定量聚合酶链式反应法：通过qPCR评估功能性寡核苷酸的含量，反映其生物活性相关的“纯度”。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：配备紫外或二极管阵列检测器，是进行IP-RP-HPLC和AEX-HPLC分析的核心设备。

超高效液相色谱仪：使用亚2微米填料色谱柱，提供更快速度、更高分辨率和灵敏度的分离分析。

毛细管电泳仪：专门用于CGE分析，通常配备紫外检测器，对短链寡核苷酸分离效果优异。

基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪：适用于寡核苷酸的快速分子量测定和纯度筛查，样品准备相对简单。

电喷雾电离质谱仪

三重四极杆质谱仪：通常与UPLC联用，可用于高灵敏度的靶向杂质定量分析。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定样品浓度和进行初步的纯度比值检查，是实验室必备基础设备。

凝胶成像系统：用于对PAGE胶进行染色、成像和分析，获取条带的光密度数据以计算纯度。

核磁共振波谱仪：高场核磁用于寡核苷酸的高级结构解析和特定原子水平的化学环境分析。

自动核酸提取与纯化工作站：用于在分析前对样品进行标准化处理，确保进样样品的一致性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。