免疫印迹法确认

检测项目

特定蛋白质的鉴定：利用抗原-抗体特异性反应，确认样品中是否存在目标蛋白质。

蛋白质分子量测定：通过与已知分子量的标准品对比，估算目标蛋白的表观分子量。

蛋白质表达水平分析：通过信号强度半定量或定量分析，比较不同样品中目标蛋白的表达丰度。

蛋白质翻译后修饰检测：确认蛋白质的磷酸化、糖基化、甲基化等特定修饰状态。

蛋白质异构体分析：区分由于剪接变异或加工不同而产生的不同蛋白亚型。

抗体特异性验证：确认所用一抗或二抗的特异性，评估其交叉反应性。

蛋白质复合物组分确认：在免疫共沉淀或Pull-down实验后，验证相互作用蛋白。

疾病相关生物标志物确认：在临床样本中确认与特定疾病相关的标志性蛋白的存在。

重组蛋白表达验证：确认工程化细胞或生物体是否成功表达外源重组蛋白。

蛋白质降解产物分析：检测蛋白质的裂解片段，用于研究细胞凋亡或酶切过程。

检测范围

细胞和组织裂解液：来自培养细胞、动物组织或植物组织的总蛋白提取物。

血清与血浆样本：用于检测循环系统中的抗体、细胞因子或其他疾病标志物。

细菌和酵母裂解物：用于验证原核或低等真核生物中的蛋白表达。

重组蛋白纯化样品：在纯化过程中监测目标蛋白的纯度和完整性。

免疫沉淀产物：经过免疫沉淀富集后的特异性蛋白样品。

亚细胞组分：如细胞核、线粒体、胞浆等分离组分的蛋白样品。

病毒颗粒蛋白：分析病毒的结构蛋白或相关抗原。

脑脊液与尿液：用于神经性疾病或肾脏疾病的生物标志物研究。

植物提取蛋白：检测植物中的特定功能蛋白或外源表达蛋白。

昆虫细胞表达系统产物：常用于杆状病毒系统表达的重组蛋白验证。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：第一步，根据分子量大小在凝胶中分离蛋白质。

蛋白质转膜：将凝胶中分离的蛋白电转移至固相支持膜（如PVDF或NC膜）上。

膜封闭：使用脱脂牛奶或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景。

一抗孵育：用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的蛋白进行孵育结合。

洗涤步骤：使用缓冲液洗去未特异性结合的一抗，降低非特异性信号。

二抗孵育：使用连接有报告酶（如HRP）或荧光基团的二抗与一抗结合。

化学发光法显影：加入化学发光底物，在HRP催化下产生光信号，通过X光胶片或成像系统捕获。

荧光法检测：使用荧光标记的二抗，直接在荧光成像仪上扫描信号。

显色法检测：使用能产生不溶性有色沉淀的底物（如DAB）进行肉眼或扫描观察。

条带分析与定量：使用图像分析软件对目标条带的强度、位置和面积进行分析和定量。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，实现蛋白质的凝胶内分离。

电转仪（湿转或半干转）：提供电场，将凝胶中的蛋白质高效转移至固相膜上。

摇床（水平或三维）：用于孵育和洗涤过程中，确保抗体或缓冲液与膜充分接触。

化学发光成像系统：高灵敏度CCD相机系统，用于捕获和记录化学发光信号。

荧光成像系统：配备特定激发和发射滤光片，用于检测荧光标记信号。

暗房与X光胶片自动洗片机：传统化学发光检测中用于胶片曝光、显影和定影。

精密电子天平：精确称量化学试剂、丙烯酰胺、过硫酸铵等以配制各种溶液。

pH计：精确测量和调整电泳缓冲液、转膜缓冲液等关键溶液的pH值。

微波炉或水浴加热器：用于加热蛋白样品，使其充分变性，或加速膜封闭、抗体孵育过程。

图像分析工作站及软件：配备专业软件（如ImageJ, Image Lab）的计算机，用于条带的定量和分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。