受体结合亲和力测定

检测项目

平衡解离常数测定：测定配体与受体在平衡状态下的解离常数，是评价亲和力的核心参数。

结合速率常数测定：量化配体与受体结合的快慢，反映结合过程的动力学特性。

解离速率常数测定：量化已形成的复合物解离的快慢，与药物作用持续时间密切相关。

半数最大抑制浓度测定：在竞争结合实验中，测定抑制50%特异性结合所需的配体浓度。

特异性结合分析：区分配体与受体的特异性结合与非特异性结合，确保数据准确性。

饱和结合实验：通过递增放射性或荧光标记配体浓度，确定受体的最大结合容量和亲和力。

竞争结合实验：使用未标记的竞争剂与标记配体竞争结合位点，用于筛选和比较不同化合物的亲和力。

热力学参数分析：通过不同温度下的结合实验，推导结合过程的焓变、熵变等热力学参数。

配体效率评估：结合亲和力与配体分子量或极性表面积等参数，评估配体的结合效率。

变构调节效应检测：研究变构调节剂对受体与原始配体结合亲和力的增强或减弱效应。

检测范围

G蛋白偶联受体：针对GPCR家族膜蛋白与药物、神经递质等配体的相互作用研究。

酶与抑制剂：测定小分子抑制剂或底物与靶酶活性位点的结合强度和机制。

抗体-抗原相互作用：评估治疗性抗体、诊断抗体与其靶抗原之间的结合亲和力与特异性。

细胞因子与受体：研究细胞因子、生长因子与其细胞表面受体的高亲和力结合。

核酸与蛋白结合：分析转录因子、调控蛋白与特定DNA/RNA序列的序列特异性结合。

核受体与配体：用于甾体激素、甲状腺激素等与核受体结合的评价。

离子通道调节剂：测定作用于离子通道门控或调节位点的配体的亲和力。

细胞粘附分子：量化介导细胞-细胞或细胞-基质相互作用的粘附蛋白间的结合力。

病毒刺突蛋白与宿主受体：研究病毒入侵机制，如SARS-CoV-2的S蛋白与ACE2受体的结合。

片段分子筛选：针对分子量较小的片段化合物库，检测其与靶标的弱亲和力结合。

检测方法

表面等离子共振技术：通过检测生物传感器表面质量变化，实时、无标记地监测分子结合与解离过程。

等温滴定量热法：通过精确测量结合过程释放或吸收的热量，直接获得热力学参数。

微量热泳动技术：基于分子在温度梯度场中的迁移率变化，在溶液中进行高灵敏度亲和力测定。

放射性配体结合分析法：使用放射性同位素标记配体，是经典的、高灵敏度的膜受体结合研究方法。

荧光偏振/各向异性：利用荧光标记配体结合大分子后偏振度增加原理，适用于快速平衡结合测定。

生物膜层干涉技术：通过白光干涉原理实时测量生物传感器上分子结合的厚度变化，操作简便。

酶联免疫吸附测定：基于固相载体和酶标二抗，常用于抗体-抗原相互作用的半定量或定量分析。

停流光谱法：将反应物快速混合并监测快速反应过程，适用于测定毫秒级的快速结合动力学。

分析型超速离心：利用沉降速度或沉降平衡原理，在溶液状态下分析复合物的形成与解离常数。

核磁共振波谱法：通过化学位移扰动、弛豫速率等变化，在原子水平研究弱到中等强度的相互作用。

检测仪器设备

表面等离子共振仪：如Biacore系列，是进行实时、无标记相互作用分析的标杆仪器。

等温滴定量热仪：如MicroCal ITC，可直接测量结合反应中的热流变化。

微量热泳动仪：如Monolith系列，所需样品量极少，且对样品纯度要求相对宽松。

液体闪烁计数器：用于检测放射性配体结合实验中由同位素衰变产生的荧光光子。

多功能酶标仪：配备荧光偏振、时间分辨荧光等功能模块，可实现高通量筛选。

生物膜层干涉系统：如FortéBio Octet系列，提供无需微流控的高通量实时分析。

停流光谱仪：配备快速混合装置和光学检测系统，用于研究快速反应动力学。

分析型超速离心机：如Beckman Coulter的Optima AUC，配备光学检测系统。

高场核磁共振波谱仪：提供高分辨率谱图，用于研究分子相互作用的构象变化。

自动化液体处理工作站：用于高通量筛选中的精准加样、稀释和反应板制备，提高效率和重现性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。