免疫印迹特异性分析

检测项目

目标蛋白鉴定：利用特异性抗体确认样本中是否存在预期的靶蛋白，是免疫印迹最基础的应用。

蛋白质表达水平分析：通过信号强度对比，对特定蛋白在不同样本（如正常与病变组织）中的相对表达量进行半定量分析。

蛋白质分子量测定：通过与已知分子量的蛋白Marker对比，确定目标蛋白的表观分子量，可用于检测翻译后修饰或剪切。

磷酸化修饰检测：使用针对特定磷酸化位点的抗体，检测信号通路中关键蛋白的磷酸化状态与水平。

糖基化修饰分析：通过分子量偏移或使用特定糖基化修饰抗体，分析蛋白质的糖基化修饰情况。

蛋白二聚体/多聚体检测：在非还原条件下，检测蛋白质是否以二聚体或多聚体的形式存在。

蛋白剪切体检测：识别蛋白质被酶切后产生的特定片段，常用于细胞凋亡（如Caspase切割）研究。

特异性抗体验证：验证新制备或购入的抗体的特异性，确认其是否只与目标蛋白结合。

蛋白相互作用间接证据：通过免疫共沉淀（Co-IP）后的免疫印迹，为蛋白质间的相互作用提供佐证。

疾病相关生物标志物检测：在临床诊断或研究中，检测与特定疾病相关的特征性蛋白标志物。

检测范围

细胞裂解液：来自培养细胞的全蛋白提取物，是研究内源性蛋白表达与修饰的最常用样本。

组织分浆液：从动物或人体组织提取的蛋白质混合物，用于在体水平研究蛋白表达。

血清/血浆样本：用于检测可溶性分泌蛋白或自身抗体，应用于疾病诊断标志物筛查。

细菌或酵母裂解物：用于原核或真核表达系统的重组蛋白鉴定与表达优化分析。

免疫沉淀/共沉淀产物：经过抗原-抗体复合物富集后的样品，用于分析特定蛋白或其互作蛋白。

亚细胞组分：如细胞核、线粒体、细胞膜等分离组分的蛋白，用于蛋白定位研究。

植物蛋白提取物：应用于植物生物学研究，分析植物特定生理病理过程中的蛋白变化。

重组蛋白纯化物：对纯化后的重组蛋白进行纯度鉴定和特异性验证。

病毒或病原体蛋白：检测病原体特异性抗原，用于传染病研究与诊断。

脑脊液等其他体液：拓展至特殊体液，用于神经系统疾病等特定领域的研究。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：根据分子量大小分离变性的蛋白质样品，为后续转印提供基础。

湿式转印法：将凝胶中的蛋白质在缓冲液环境中电转移至PVDF或NC膜上，适用于大多数蛋白。

半干式转印法：使用浸有缓冲液的滤纸作为介质进行快速转印，节省时间与缓冲液。

封闭：使用BSA、脱脂奶粉等封闭液覆盖膜上的非特异性位点，防止抗体非特异性吸附。

一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的靶蛋白进行特异性结合。

二抗孵育：使用连接有酶（如HRP）或荧光基团的二抗，与一抗的Fc段结合进行信号放大。

化学发光法（ECL）显色：HRP催化底物产生化学发光信号，通过X光胶片或成像系统捕获。

荧光检测法：使用荧光标记的二抗，直接在荧光成像仪上扫描，具有多重检测潜力。

显色底物法（DAB/NBT/BCIP）：酶催化产生不溶性有色沉淀，直接肉眼观察，无需成像仪。

Strip与Reprobe：使用特殊缓冲液洗脱膜上的抗体，以便用其他抗体对同一张膜进行再次检测。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，配备玻璃板、梳子等以形成凝胶并完成电泳分离。

转印仪（槽式/半干式）：提供稳定电场，将凝胶中的蛋白质高效、均匀地转移至固相膜上。

电源：为电泳和转印过程提供恒压、恒流或恒功率的稳定直流电。

摇床：用于孵育抗体和洗涤膜时提供温和的振荡，确保反应均匀充分。

化学发光成像系统：核心检测设备，高灵敏度CCD相机捕获化学发光信号并进行图像分析。

荧光成像系统：配备特定激发/发射滤光片，用于检测荧光标记二抗发出的信号。

X光胶片暗盒与洗片机：传统的化学发光信号记录方式，通过胶片曝光、显影、定影获得结果。

凝胶成像分析软件：对捕获的图像进行条带识别、分子量计算、光密度定量等专业分析。

微量分光光度计：用于精确测定蛋白质样品浓度，确保上样量一致。

制冰机与低温冰箱

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。