抑制剂特异性验证

检测项目

激酶谱筛选：在包含数百种重组激酶的 panel 中测试抑制剂活性，评估其对非靶标激酶的交叉反应性。

细胞活力测定：在多种细胞系JianCe测抑制剂对细胞增殖的影响，初步判断其选择性毒性。

靶蛋白结合亲和力测定：通过SPR或ITC等技术精确测量抑制剂与靶蛋白的结合常数（Kd）。

脱靶效应全基因组筛选：利用CRISPR-Cas9或RNAi技术进行全基因组筛选，系统性发现潜在的脱靶通路。

蛋白质组学分析：采用化学蛋白质组学方法（如基于活性的蛋白分析，ABPP）鉴定细胞内所有与抑制剂结合的蛋白。

代谢稳定性测试：在肝微粒体或肝细胞中评估抑制剂的代谢速率，预测其体内特异性维持时间。

细胞信号通路磷酸化分析：通过磷酸化抗体芯片或Western Blot检测下游关键信号分子磷酸化水平的变化。

同源蛋白家族成员测试：针对与靶蛋白高度同源的其他家族成员进行活性测试，验证家族内选择性。

细胞表型拯救实验：在抑制剂处理后，通过表达耐药突变靶标或激活下游通路来逆转表型，确认靶点特异性。

动物模型体内药效与毒性评估：在疾病动物模型中验证药效，并监测与脱靶效应相关的毒性指标。

检测范围

人类激酶组：覆盖超过500种人类蛋白激酶，是评估激酶抑制剂选择性的黄金标准范围。

GPCR家族：针对G蛋白偶联受体抑制剂，测试其对不同亚型受体的激活或抑制活性。

离子通道：评估抑制剂对各类电压门控或配体门控离子通道功能的影响。

核受体超家族：检测抑制剂对雌激素受体、雄激素受体等核受体活性的调节作用。

表观遗传调控蛋白：包括组蛋白去乙酰化酶、甲基转移酶、去甲基化酶等表观遗传修饰酶。

蛋白酶与肽酶：如蛋白酶体、胱天蛋白酶、血管紧张素转换酶等水解酶家族。

细胞周期与凋亡相关蛋白：验证抑制剂对CDK、Bcl-2、IAP等关键调控蛋白的选择性。

代谢酶类：包括细胞色素P450酶系、脱氢酶、转移酶等，评估代谢相互作用和毒性。

结构类似ATP结合蛋白：检测抑制剂对其它利用ATP作为辅因子的非激酶蛋白的干扰。

物种同源蛋白：比较抑制剂对人类、大鼠、小鼠等不同物种同源靶蛋白活性的差异，为临床前研究提供依据。

检测方法

放射性配体结合 assay：使用标记的放射性配体竞争性结合，定量测定抑制剂的结合能力与选择性。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测抑制剂分子与固定化靶蛋白之间的结合动力学。

等温滴定量热法：通过测量结合过程中热量的变化，直接得到结合亲和力与热力学参数。

荧光偏振/各向异性：利用荧光标记配体结合后偏振光的变化，快速检测抑制剂的竞争性抑制。

AlphaScreen/AlphaLISA 均相检测：基于珠状微粒的能量转移，用于高通量筛选环境下的特异性验证。

CETSA 细胞热位移分析：在完整细胞内检测抑制剂与靶蛋白结合引起的热稳定性变化，反映细胞内靶点结合。

DARTS 药物亲和力响应靶点稳定性：利用抑制剂结合后对蛋白酶水解的抗性，鉴定细胞裂解液中的靶点。

基于质谱的化学蛋白质组学：将抑制剂设计成带有富集标签的探针，钓取并鉴定全细胞蛋白质组中的结合蛋白。

细胞热蛋白质组分析：将CETSA与定量质谱联用，在全蛋白质组水平绘制药物引起的热稳定性图谱。

晶体共衍射分析：解析抑制剂-靶蛋白复合物的高分辨率晶体结构，从原子层面验证结合模式与特异性。

检测仪器设备

多功能酶标仪：用于进行吸光度、荧光、化学发光等多种模式的微孔板读数，是生化assay的核心设备。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，专门用于实时生物分子相互作用分析，提供动力学数据。

等温滴定量热仪：如MicroCal ITC，直接测量生物分子结合过程中的热变化。

液相色谱-质谱联用仪：用于化学蛋白质组学样品分析、代谢产物鉴定及定量蛋白质组学。

高内涵细胞成像分析系统：自动化获取和分析细胞表型图像，用于多参数细胞水平特异性评估。

实时荧光定量PCR仪：检测抑制剂处理后特定基因表达水平的变化，间接反映通路特异性抑制。

蛋白质纯化系统

X射线晶体衍射仪

流式细胞仪

自动化液体处理工作站

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。