腺苷二磷酸核糖含量测定

检测项目

总ADP-核糖含量：测定样本中所有形式（游离与结合）的ADP-核糖分子的总量。

游离ADP-核糖：测定未与任何蛋白质或其它分子结合的、处于自由状态的ADP-核糖浓度。

蛋白结合ADP-核糖：测定通过共价键修饰在蛋白质上的ADP-核糖基团的总量。

单ADP-核糖基化水平：测定单个蛋白质分子上被修饰的ADP-核糖单元数量。

多聚ADP-核糖链长度：分析由PARP酶催化生成的线性或分支状多聚ADP-核糖链的平均聚合度。

PARP酶活性评估：通过测定反应生成的ADP-核糖来间接评估聚ADP-核糖聚合酶的催化活性。

去ADP-核糖基化酶活性：通过监测ADP-核糖底物的消耗来评估如PAR糖水解酶等分解酶的活性。

特定蛋白的ADP-核糖基化修饰：针对某个目标蛋白（如组蛋白、p53），测定其被ADP-核糖修饰的特异性水平。

细胞/组织内ADP-核糖动态变化：监测在特定刺激（如DNA损伤、氧化应激）下，细胞内ADP-核糖含量的时序性变化。

ADP-核糖代谢物分析：测定ADP-核糖代谢途径中的相关中间产物，如烟酰胺等。

检测范围

动物组织匀浆：适用于从肝脏、脑、心脏等动物组织中提取的样本进行内源性ADP-核糖分析。

培养的哺乳动物细胞：适用于贴壁或悬浮培养的细胞系，用于研究细胞信号通路与应激反应。

植物组织提取物：适用于研究植物抗逆或发育过程中ADP-核糖基化修饰的作用。

细菌裂解液：适用于研究细菌毒素（如霍乱毒素）相关的ADP-核糖基化机制。

血清/血浆样本：探索ADP-核糖作为潜在疾病生物标志物在循环系统中的含量。

体外酶反应体系：适用于纯化的酶（如PARP）与底物在体外进行反应的产物定量。

免疫沉淀复合物：对通过免疫沉淀富集的特异性蛋白复合物进行修饰分析。

亚细胞组分：适用于分离的细胞核、线粒体、细胞质等组分，进行定位研究。

临床病理标本：如肿瘤组织切片，用于研究ADP-核糖基化与疾病发生发展的关联。

药品与抑制剂筛选：用于评估候选药物对ADP-核糖代谢通路的影响及效力。

检测方法

高效液相色谱法：利用反相或离子交换色谱分离，通过紫外或荧光检测器对ADP-核糖进行高灵敏度定量。

液相色谱-质谱联用法：结合LC的分离能力与MS的高特异性、高灵敏度，可进行精确鉴定和绝对定量。

酶联免疫吸附测定法：使用特异性抗体，通过夹心法或竞争法检测蛋白结合的或游离的ADP-核糖，通量高。

基于点击化学的检测：将带有炔烃或叠氮基团的NAD+类似物掺入细胞，通过点击反应连接报告基团进行可视化或定量。

放射性标记法：使用放射性同位素标记的NAD+作为底物，通过测定掺入产物的放射性强度来定量，是经典方法。

荧光光度法：利用某些酶促反应将ADP-核糖转化为具有荧光的物质，或使用荧光染料特异性结合进行检测。

蛋白质印迹分析：使用抗PAR或抗单ADP-核糖的特异性抗体，对修饰蛋白进行半定量免疫检测。

毛细管电泳法：利用毛细管电泳的高分离效率分离ADP-核糖及其衍生物，配合紫外或激光诱导荧光检测。

生物传感器法：利用固定化的酶或适配体作为识别元件，将ADP-核糖浓度信号转化为电化学或光学信号。

薄层色谱法：一种传统的分离分析方法，可用于初步分离和鉴定放射性标记的ADP-核糖产物。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：核心分离设备，包含泵、进样器、色谱柱和检测器，用于复杂样本中ADP-核糖的分离与定量。

三重四极杆质谱仪：与LC联用，通过多反应监测模式实现ADP-核糖的高选择性、高灵敏度靶向定量分析。

酶标仪：用于读取ELISA等基于微孔板的检测实验中吸光度、荧光或化学发光信号，实现高通量分析。

液体闪烁计数器：专门用于测量放射性同位素标记实验中样本的放射性强度，适用于传统放射性方法。

荧光分光光度计：用于测量溶液中荧光物质的发射光谱和强度，适用于基于荧光的定量分析。

化学发光成像系统：用于捕获蛋白质印迹膜上化学发光信号，对PAR化蛋白进行成像和半定量分析。

毛细管电泳系统：集成高压电源、毛细管、检测器等，用于微量样本中ADP-核糖的高效分离分析。

超声波细胞破碎仪

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。