细胞裂解液蛋白定量

检测项目

总蛋白浓度测定：测定细胞裂解液中所有可溶性蛋白质的总浓度，是后续实验的基础。

样品均一性评估：评估不同样品间蛋白浓度的差异，确保后续比较实验的公平性。

上样量标准化：根据定量结果，调整各样品至相同蛋白浓度，保证电泳或检测时上样量一致。

裂解效率验证：通过定量结果间接评估细胞裂解是否充分、完全。

样品保存状态监测：定期定量可监测样品在储存过程中是否发生降解或沉淀。

Western Blot前处理：为Western Blot实验计算并准备含有等量蛋白质的样品。

酶活性测定标准化：在酶活性测定中，将结果校正为单位蛋白质量的活性，以消除样品浓度差异。

蛋白质组学分析前处理：为质谱等蛋白质组学分析提供浓度均一的样品。

细胞培养条件优化评估：比较不同培养条件下细胞的总蛋白产量，评估细胞状态。

药物处理效应初筛：通过检测药物处理后细胞总蛋白含量的变化，初步判断药物对细胞代谢的影响。

检测范围

哺乳动物细胞裂解液：包括贴壁细胞和悬浮细胞经RIPA等裂解液处理后的样品。

植物组织裂解液：经研磨和裂解后的植物组织提取液，可能含有较多干扰物质。

细菌裂解液：超声波或酶解法破碎细菌后获得的裂解上清液。

酵母裂解液：通过玻璃珠振荡或酶解破壁获得的酵母蛋白提取物。

组织匀浆上清液：动物组织经机械匀浆和离心后获得的可溶性蛋白组分。

亚细胞组分蛋白：如细胞核、线粒体、胞浆等分离组分的裂解液。

免疫沉淀（IP）洗脱液：免疫沉淀实验后洗脱下来的目标蛋白及其复合物溶液。

蛋白纯化中间品：在层析纯化过程中收集的各个流分，需要快速定量以监控纯化进程。

含有去垢剂的样品：含有SDS、Triton X-100等去垢剂的裂解液，需选用兼容的方法。

低浓度蛋白样品：如稀溶液、珍贵样品或蛋白表达量极低的样品，需要高灵敏度方法检测。

检测方法

BCA法：基于双缩脲反应原理，在碱性条件下蛋白质将Cu²⁺还原为Cu⁺，后者与BCA试剂显色。抗去垢剂干扰能力强，灵敏度高。

Bradford法：考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后发生颜色变化，最大吸收峰从465nm移至595nm。快速简便，但对去垢剂敏感。

Lowry法：结合双缩脲反应和Folin-酚试剂反应，灵敏度高于单独的双缩脲法。但步骤繁琐，受多种物质干扰。

紫外吸收法（A280）：利用蛋白质中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸在280nm处的紫外吸收进行测定。样品无需消耗，但对核酸污染敏感。

二辛可宁酸法：与BCA法原理类似，但使用不同的螯合剂。具有良好的线性和重现性。

荧光染料法：使用如NanoOrange、CBQCA等荧光染料与蛋白质结合，通过检测荧光强度定量。灵敏度极高，适用于微量样品。

胶体金法：基于蛋白质与胶体金颗粒结合导致颜色变化的原理，可用于快速半定量或膜上定量。

红外光谱法：通过检测蛋白质酰胺键在特定红外波段的吸收来定量，几乎不受任何试剂干扰。

凯氏定氮法：通过测定样品中的总氮含量来推算蛋白质含量。是经典的绝对定量方法，但操作复杂。

SDS-PAGE电泳半定量法：通过比较样品条带与已知浓度标准蛋白条带的染色强度进行粗略估计。

检测仪器设备

酶标仪：最常用的高通量检测设备，可同时读取96孔板或384孔板中多个样品的吸光度或荧光值。

分光光度计：用于紫外吸收法（A280）或Bradford法等需要测量特定波长吸光度的传统方法。

荧光分光光度计：专门用于检测荧光信号，配合荧光染料法可实现超高灵敏度蛋白定量。

纳米滴度计：基于紫外吸收原理的微量检测设备，仅需1-2μL样品，快速方便，适合珍贵样品。

化学发光成像系统：可用于检测化学发光或荧光信号，并对SDS-PAGE胶或膜上的蛋白进行半定量分析。

红外光谱仪：用于执行红外光谱法蛋白定量，特别适合含有高浓度去垢剂等强干扰物质的样品。

自动液体处理工作站：实现BCA、Bradford等试剂加样、孵育和转移的自动化，提高通量和重复性。

离心机

涡旋振荡器：用于充分混匀细胞裂解液、标准品及反应试剂，确保反应均一性。

恒温孵育器

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。