荚膜多糖结合物测定

检测项目

多糖含量测定：定量分析结合物中荚膜多糖的绝对含量，是评价结合物载量的基础指标。

蛋白质含量测定：测定结合物中载体蛋白（如破伤风类毒素、白喉类毒素CRM197）的含量。

多糖与蛋白的摩尔结合比：计算多糖与载体蛋白的摩尔比例，是评价结合化学计量关系的关键参数。

游离多糖含量：检测未与载体蛋白成功结合的游离多糖，其含量需严格控制以确保疫苗效力。

游离蛋白含量：测定反应后未参与结合的游离载体蛋白含量，关乎产品纯度和安全性。

分子大小分布：分析结合物分子的流体力学半径或分子量分布，反映结合物的均一性。

结合效率：评估初始投料中成功转化为结合物的多糖百分比，是工艺优化的重要指标。

糖醛酸含量：针对含有糖醛酸的多糖（如肺炎球菌多糖），用于特异性定量和结构确认。

O-乙酰基含量：测定多糖链上O-乙酰基团的含量，此基团对多糖的免疫原性有重要影响。

磷含量：对于含磷的细菌荚膜多糖（如脑膜炎球菌多糖），通过测磷来间接计算多糖含量。

检测范围

肺炎球菌结合疫苗：针对13价、15价、20价等肺炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的结合物进行质控。

脑膜炎球菌结合疫苗：涵盖A、C、W135、Y等血清群脑膜炎球菌多糖与蛋白的结合物测定。

b型流感嗜血杆菌结合疫苗：对Hib荚膜多糖（聚核糖基核糖醇磷酸盐）结合物的关键属性进行分析。

伤寒Vi多糖结合疫苗：测定伤寒沙门氏菌Vi荚膜多糖与载体蛋白的结合物质量。

联合疫苗中的结合物组分：在五联、六联等多价联合疫苗中，对各多糖结合物组分进行单独或同步分析。

结合物原液：对纯化后的结合物原液进行全面的理化与免疫化学表征。

结合物成品制剂：对最终灌装疫苗中的结合物稳定性、含量及分子大小进行放行检验。

工艺中间体：在活化、结合、纯化等各工艺阶段对中间产物进行监控，指导工艺控制。

稳定性研究样品：在加速和长期稳定性试验中，监测结合物各项指标随时间的变化。

参比品与标准品：对国际或国家参考品、工作标准品进行赋值和标定。

检测方法

高效液相色谱法：采用凝胶过滤色谱或尺寸排阻色谱分析分子大小分布和纯度。

比色法（如间羟基联苯法）：特异性检测糖醛酸含量，用于肺炎球菌等多糖的定量。

Lowry法或BCA法：用于准确测定结合物及中间品中的蛋白质含量。

磷测定法：通过硫酸消化后钼蓝比色，定量含磷多糖，间接计算多糖含量。

O-乙酰基测定法：基于羟胺-FeCl3反应，比色测定多糖链上的O-乙酰基含量。

免疫化学方法（如ELISA）：利用特异性抗体，定量具有天然构象的表位含量，评估免疫活性。

核磁共振波谱法：用于多糖一级结构、O-乙酰化程度及结合后结构变化的精密分析。

浊度法：快速测定细菌多糖含量，基于多糖与特异性抗体形成免疫复合物产生的浊度。

还原末端分析法：通过测定还原末端变化，评估多糖链在活化与结合过程中的断裂情况。

毛细管电泳法：用于高分辨率分离和定量分析结合物、游离多糖及游离蛋白。

检测仪器设备

高效液相色谱系统：配备示差折光、紫外及多角度激光光散射检测器，用于分离和表征。

紫外-可见分光光度计：用于执行各种比色分析，如蛋白、糖醛酸、磷等含量的测定。

酶标仪：用于酶联免疫吸附试验，定量分析具有免疫活性的多糖或结合物。

分析天平：高精度天平，用于准确称量样品和标准品，是定量分析的基础。

pH计：精确测量溶液pH值，确保样品处理及色谱流动相条件准确。

恒温水浴槽：为需要特定温度反应的化学测定（如显色反应）提供温控环境。

离心机：用于样品预处理，如沉淀蛋白、分离澄清上清液等。

氮吹仪或真空浓缩仪：用于温和地浓缩样品，以提高检测灵敏度。

核磁共振波谱仪：高分辨率NMR用于多糖及结合物的精细结构解析。

毛细管电泳系统：提供高分辨率的分离能力，用于复杂样品的分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。