MTT法细胞活力测定

检测项目

细胞增殖活性：评估药物、生长因子或特定培养条件下细胞的增殖能力。

细胞毒性：检测化学药物、纳米材料或环境毒素对细胞的杀伤或抑制效果。

药物敏感性：筛选不同浓度药物对特定细胞系（如肿瘤细胞）的抑制作用。

生物材料相容性：评价植入材料或医疗器械表面对细胞生长的影响。

免疫细胞活性：测定淋巴细胞等免疫细胞在刺激因子作用下的增殖反应。

肿瘤细胞耐药性：研究肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性的程度与机制。

基因功能影响：分析过表达或敲除特定基因后对细胞存活与增殖的影响。

血清或培养基效力：比较不同批次血清或培养基配方支持细胞生长的效能。

辐射效应：评估不同剂量辐射对细胞活力的损伤作用。

病毒感染效应：测定病毒感染宿主细胞后导致的细胞病变及活力下降。

检测范围

贴壁细胞系：适用于如HeLa、HEK293、HepG2等需要在培养皿表面贴附生长的细胞。

悬浮细胞系：适用于如Jurkat、U937等生长于培养液中的淋巴细胞或血液癌细胞。

原代培养细胞：可用于从组织中直接分离培养的细胞，但需注意其增殖能力可能较弱。

干细胞研究：用于评估干细胞在分化或自我更新过程中的活力变化。

肿瘤学研究：广泛应用于各种实体瘤和血液肿瘤细胞的药敏测试与基础研究。

药物开发与筛选：在药物发现初期，用于高通量筛选候选化合物的细胞毒性。

毒理学研究：评估环境污染物、工业化学品或化妆品成分的细胞毒性。

中医药研究：用于筛选中药提取物或复方中具有抗癌或细胞保护作用的有效成分。

纳米生物医学：评价纳米颗粒、纳米药物载体的生物安全性与细胞毒性。

食品科学：检测食品添加剂、功能性成分或污染物对细胞模型的影响。

检测方法

细胞接种与培养：将处于对数生长期的细胞以适当密度接种于96孔板，在CO2培养箱中培养过夜使其贴壁。

实验处理：吸弃旧培养基，加入含有不同浓度待测药物或处理因素的新鲜培养基。

设置对照组：必须设置空白对照组（仅培养基，无细胞）、阴性对照组（细胞+溶剂）和阳性对照组（细胞+已知毒性药物）。

MTT溶液添加：处理结束后，每孔加入适量MTT溶液（终浓度通常为0.5 mg/mL），继续孵育2-4小时。

甲瓒结晶形成：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将黄色MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲瓒结晶。

终止反应与溶解：小心吸弃孔内培养基，加入二甲基亚砜（DMSO）或酸化异丙醇等溶剂溶解甲瓒结晶。

振荡混匀：将培养板置于平板振荡器上低速振荡10-15分钟，确保结晶完全溶解且溶液均匀。

吸光度检测：使用酶标仪在490 nm或570 nm波长处检测各孔的吸光度值（OD值）。

数据计算：计算各处理组的平均OD值，减去空白对照OD值后，以阴性对照组为100%计算细胞存活率。

结果分析：绘制剂量-效应曲线，计算半数抑制浓度（IC50）等参数，进行统计学分析。

检测仪器设备

CO2细胞培养箱：为细胞提供恒定的温度（37℃）、湿度和CO2浓度（通常5%）的生长环境。

生物安全柜或超净工作台：提供无菌操作环境，用于细胞接种、换液等所有开放式操作。

倒置显微镜：用于日常观察细胞形态、密度、贴壁状况及污染情况。

微量移液器及灭菌吸头：用于精确移取微量液体，如细胞悬液、MTT试剂、溶剂等。

细胞计数板或自动细胞计数器：用于对细胞悬液进行计数，以确保接种密度准确一致。

96孔细胞培养板：标准检测载体，通常使用平底透明板，便于吸光度检测。

多通道移液器：提高向96孔板中添加或吸取试剂的操作效率与均一性。

酶标仪（微孔板读数仪）：核心检测设备，用于读取溶解甲瓒后溶液在特定波长下的吸光度值。

平板振荡器：用于溶解甲瓒结晶时振荡培养板，使结晶充分溶解并混匀溶液。

离心机：用于制备细胞悬液前离心收集细胞，或处理悬浮细胞时离心更换培养基。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。