氨基酸脱酰胺化分析

检测项目

天冬酰胺（Asn）脱酰胺化程度：定量测定蛋白质中天冬酰胺残基转化为天冬氨酸或异天冬氨酸的总体比例，是评估稳定性的核心指标。

谷氨酰胺（Gln）脱酰胺化程度：定量测定谷氨酰胺残基转化为谷氨酸的总体比例，尤其在特定序列环境下需重点关注。

特定位点脱酰胺化率：精确定位并定量蛋白质序列中特定易感位点（如NG、NS序列）的脱酰胺化修饰比例。

异天冬氨酸（isoAsp）含量：特异性检测脱酰胺化主要产物之一异天冬氨酸的生成量，其形成可能影响蛋白结构与功能。

天冬氨酸（Asp）含量：检测脱酰胺化另一直接产物天冬氨酸的含量变化，用于计算脱酰胺化途径的比例。

脱酰胺化引起的电荷变体分析：评估因脱酰胺化导致蛋白质净电荷增加（每个修饰增加一个负电荷）而产生的酸性电荷变体群。

肽图水平脱酰胺化定位：通过肽图分析，精确鉴定发生脱酰胺化的具体肽段及氨基酸位点。

脱酰胺化动力学研究：在加速稳定性或强制降解条件下，研究脱酰胺化反应速率常数、活化能等动力学参数。

脱酰胺化对生物活性影响：关联分析脱酰胺化程度与蛋白质生物学功能（如抗原结合、酶活性）的损失相关性。

脱酰胺化与高级结构关联分析：研究脱酰胺化修饰对蛋白质二级、三级结构的影响，如α-螺旋、β-折叠及空间构象的变化。

检测范围

治疗性单克隆抗体：涵盖IgG1, IgG2, IgG4等各种亚型，重点检测其互补决定区（CDR）和Fc区的易脱酰胺位点。

重组治疗性蛋白：包括细胞因子、激素、酶、融合蛋白等，评估其整个分子中的脱酰胺化敏感性。

抗体偶联药物（ADC）：分析抗体部分在连接子和毒素偶联工艺及储存过程中的脱酰胺化稳定性。

双特异性抗体及多特异性抗体：检测其复杂结构中可能新引入或固有的易脱酰胺化位点。

血液制品与血浆蛋白：如凝血因子、人血清白蛋白等，监控其生产与储存期间的脱酰胺化变化。

疫苗抗原蛋白：确保关键抗原表位区域的脱酰胺化不影响其免疫原性与疫苗效力。

细胞与基因治疗产品中的蛋白组分：对病毒载体衣壳蛋白、辅助蛋白等进行脱酰胺化监控。

生物类似药：与原研药进行脱酰胺化修饰谱的对比分析，是质量相似性评价的关键一环。

药物制剂与中间体：检测制剂处方（pH、缓冲液、辅料）及中间体储存条件对脱酰胺化的影响。

强制降解样品与稳定性样品：分析在高温、高pH、光照等应激条件下产生的脱酰胺化产物，用于确定降解途径。

检测方法

肽图-液相色谱质谱联用法（Peptide Mapping LC-MS/MS）：金标准方法。通过酶切、LC分离、高分辨率质谱鉴定和定量，实现位点特异性分析。

离子交换色谱法（IEC-HPLC或CEX）：利用脱酰胺化引起的电荷差异，分离并定量酸性电荷变体。

毛细管等电聚焦法（cIEF）：高分辨率分离电荷异构体，灵敏检测由脱酰胺化导致的等电点（pI）微小偏移。

反相高效液相色谱法（RP-HPLC）：结合肽图使用，分离酶切后的肽段，常用于发现脱酰胺化引起的疏水性微小变化。

酶法检测异天冬氨酸：使用蛋白异天冬氨酸甲基转移酶（PIMT）特异性识别并标记isoAsp，随后通过检测标记产物进行定量。

疏水相互作用色谱法（HIC-HPLC）：间接评估因脱酰胺化可能引起的局部疏水性变化和高级结构改变。

尺寸排阻色谱法（SEC-HPLC）：排除聚集和片段化的干扰，确保分析的脱酰胺化信号来源于完整的单体蛋白。

毛细管电泳-十二烷基硫酸钠法（CE-SDS）：在还原和非还原条件下，确认脱酰胺化分析不受碎片干扰。

圆二色谱法（CD）：用于研究脱酰胺化对蛋白质二级结构（远紫外CD）和三级结构（近紫外CD）的宏观影响。

差异扫描量热法（DSC）：通过测量热变性温度（Tm）的变化，评估脱酰胺化对蛋白质整体热稳定性的影响。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪（HRMS）：如Q-TOF、Orbitrap系列，是进行精确质量测定和位点鉴定的核心设备，需具备MS/MS功能。

三重四极杆质谱仪（QQQ-MS）：用于靶向定量分析特定脱酰胺化肽段，具有高灵敏度和优异定量能力。

超高效液相色谱仪（UHPLC）：与质谱联用，提供快速、高分离度的肽段或蛋白变体分离。

高效液相色谱仪（HPLC）：配备多种检测器（UV、DAD、FLR），用于IEC、RP-HPLC、SEC、HIC等色谱分析。

毛细管电泳仪（CE）：用于cIEF和CE-SDS分析，进行高分辨率的电荷变体分析和纯度检测。

酶标仪或荧光检测器：用于酶法检测异天冬氨酸等基于光学读数的检测方法。

圆二色谱仪：用于快速评估蛋白质的二级和三级结构变化。

差示扫描量热仪：用于精确测量蛋白质的热稳定性参数。

蛋白质消化与处理工作站：自动化样品前处理系统，包括还原烷基化、酶解等步骤，提高肽图分析的重现性。

稳定性试验箱：提供可控的温度、湿度、光照条件，用于产生强制降解样品和进行长期稳定性研究。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。