抑制剂解离常数测定

检测项目

抑制剂解离常数（Ki值）：表征抑制剂与靶点（如酶、受体）结合紧密程度的定量参数，Ki值越小，结合力越强。

抑制类型判定：确定抑制剂属于竞争性、非竞争性、反竞争性或混合型抑制，对理解作用机制至关重要。

半数抑制浓度（IC50）：在特定实验条件下，抑制50%靶点活性所需的抑制剂浓度，是计算Ki值的基础数据之一。

酶促反应动力学参数（Km, Vmax）：测定米氏常数和最大反应速率，用于分析抑制剂对酶动力学的影响。

结合亲和力：直接或间接评估抑制剂与靶点分子间的相互作用强度。

特异性分析：评估抑制剂对目标靶点相对于其他类似靶点的选择性。

结合位点分析：通过竞争实验等手段，推断抑制剂在靶点上的结合区域。

热力学参数：部分高级研究可推导结合过程的焓变、熵变等热力学信息。

时间依赖性抑制评估：判断抑制作用是瞬时发生还是随时间增强，区分可逆与不可逆抑制。

数据质量评估：包括拟合优度、误差分析等，确保测得的Ki值可靠、准确。

检测范围

小分子化合物库：针对大量候选药物分子进行初步筛选和Ki值测定。

天然产物提取物：从植物、微生物中分离的活性成分，评估其抑制效能。

酶抑制剂：广泛应用于激酶、蛋白酶、磷酸酶等各种酶类靶点的抑制剂研究。

受体拮抗剂/激动剂：测定与G蛋白偶联受体、核受体等结合的配体的Ki值。

抗体与蛋白药物：评估治疗性抗体或蛋白类药物与靶抗原/受体的结合亲和力。

核酸适配体：测定能够特异性结合靶蛋白的核酸分子的解离常数。

片段分子：在基于片段的药物发现中，测定低分子量、低亲和力片段的Ki值。

共价抑制剂：虽然通常不可逆，但其初始可逆结合阶段的Ki值有时也可被评估。

细胞膜整合蛋白：在膜制备物或模拟膜环境中测定相关抑制剂的Ki值。

病毒蛋白抑制剂：如针对HIV蛋白酶、SARS-CoV-2主蛋白酶等病毒关键蛋白的抑制剂。

检测方法

酶动力学分析法：通过测量不同底物和抑制剂浓度下的初始反应速率，利用Lineweaver-Burk或Dixon等作图法计算Ki。

等温滴定量热法：直接测量结合过程中释放或吸收的热量，一次性获取Ki、焓变、熵变等全套参数。

表面等离子体共振技术：实时、无标记地监测分子结合与解离过程，直接得到结合速率和解离速率，进而计算Ki。

荧光偏振/各向异性：利用荧光标记的配体与靶点结合后偏振度改变的原理，通过竞争实验测定未标记抑制剂的Ki值。

微量热泳动法：基于分子在温度梯度场中的迁移率变化来检测结合事件，适用于溶液内测定，样品消耗少。

放射性配体结合分析法：使用放射性标记的配体与抑制剂竞争结合靶点，是测定膜受体等靶点Ki值的经典方法。

停流光谱法：用于研究快速结合动力学，通过快速混合反应物并监测信号变化，获取结合速率常数。

基于活性的蛋白质分析：对于共价抑制剂，可使用带有报告基团的活性探针进行竞争性结合实验。

细胞功能抑制试验：在细胞水平测量抑制剂对特定通路或功能的抑制效果，间接反映其与细胞内靶点的作用强度。

计算机模拟与分子对接：通过计算化学方法预测抑制剂与靶点的结合模式和亲和力，辅助实验Ki值的解读。

检测仪器设备

酶标仪：具备吸光度、荧光、发光等多种检测模式，用于高通量酶活抑制实验和IC50测定。

等温滴定量热仪：用于ITC实验，高精度测量结合热，是获得热力学信息的金标准设备。

表面等离子体共振仪：SPR技术的核心设备，可实现实时、动态的分子互作分析。

荧光光谱仪：包括稳态和瞬态荧光光谱仪，用于荧光偏振、荧光淬灭等基于荧光的结合实验。

微量热泳动仪：专门用于MST技术，检测样品在毛细管中的温度梯度迁移。

液相色谱-质谱联用仪：用于分析复杂体系（如细胞裂解液）中的抑制剂浓度或底物转化率。

停流装置：通常与快速检测光谱仪（如UV-Vis，荧光）联用，用于研究快速反应动力学。

放射性活度计数仪：如液闪计数器，用于检测放射性配体结合实验中的放射性信号。

高性能计算集群：用于运行分子动力学模拟、自由能计算等，进行Ki值的理论预测。

自动化液体处理工作站：用于高通量筛选时精确、快速地分配试剂和样品，提高实验效率和重复性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。