双向电泳仪分离

检测项目

全蛋白表达谱分析：用于分离和展示细胞、组织或体液样本中几乎所有可溶性蛋白质的全局表达情况。

差异表达蛋白质筛选：通过比较不同生理或病理状态下的蛋白质图谱，识别表达量上调和下调的蛋白质点。

蛋白质翻译后修饰检测：可分离和检测磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰引起的蛋白质电荷和分子量变化。

蛋白质复合物亚基分离：将复杂的蛋白质复合物解离为其组成亚基，以便进行后续的鉴定和分析。

生物标志物发现：在疾病与健康样本的对比中，寻找具有诊断或预后价值的特异性蛋白质标志物。

蛋白质纯度鉴定：评估蛋白质纯化产物的均一性，检查是否存在杂质蛋白或降解片段。

蛋白质异构体分析：分离由可变剪接或不同翻译后修饰产生的、分子量相近但等电点不同的蛋白质异构体。

亚细胞器蛋白质组分析：分离特定细胞器（如线粒体、细胞核）的蛋白质，研究其组成和功能。

物种间比较蛋白质组学：比较不同物种间同源组织或细胞的蛋白质表达差异，用于进化或功能研究。

药物或刺激应答蛋白鉴定：分析细胞或生物体在药物处理或环境刺激前后蛋白质表达的变化。

检测范围

临床组织样本：如癌组织与癌旁正常组织，用于肿瘤蛋白质组学研究。

血清与血浆：寻找循环系统中的疾病生物标志物，是临床诊断研究的重要样本。

细胞培养物：包括贴壁细胞、悬浮细胞，用于研究细胞信号通路、应激反应等。

植物叶片与根系：应用于植物抗逆性、生长发育及品种鉴定的蛋白质组分析。

微生物全菌蛋白：用于细菌、真菌等微生物的生理状态、致病机制及耐药性研究。

脑脊液与尿液：这类体液样本可用于神经系统疾病、泌尿系统疾病的生物标志物挖掘。

食品与农产品：检测食品中的过敏原、真伪鉴别蛋白以及农产品品质相关蛋白。

海洋生物样本：应用于海洋生态学、极端环境生物适应机制等研究领域。

古生物与考古样本：从化石或古代遗存中提取微量蛋白质，进行物种鉴定和进化分析。

重组蛋白表达系统：评估工程菌或细胞表达重组蛋白的产量、完整性和修饰状态。

检测方法

样品制备与裂解：使用含有尿素、硫脲、CHAPS等的裂解液充分裂解细胞，释放并溶解蛋白质，同时加入蛋白酶抑制剂防止降解。

蛋白质定量：采用Bradford法、BCA法等对总蛋白进行精确定量，以确保上样量一致。

第一向等电聚焦：将蛋白质样品加载于IPG胶条上，在高压电场下根据蛋白质的等电点进行分离。

IPG胶条平衡：聚焦后的胶条先后在含有DTT和碘乙酰胺的平衡液中孵育，以还原蛋白质并烷基化巯基。

第二向SDS-PAGE：将平衡后的胶条转移至SDS聚丙烯酰胺凝胶的顶端，根据蛋白质的分子量进行垂直方向的分离。

蛋白质染色：常用考马斯亮蓝染色、银染或荧光染色等方法使凝胶上的蛋白质点可视化。

凝胶图像扫描与分析：使用高分辨率扫描仪获取凝胶图像，并通过专业软件进行斑点检测、匹配和差异分析。

目标蛋白点切取：使用切胶仪或手动切取感兴趣的差异蛋白质点，用于后续鉴定。

胶内酶解：将胶粒中的蛋白质进行脱色、还原、烷基化和胰蛋白酶酶解，生成肽段混合物。

质谱鉴定与数据分析：将酶解肽段通过MALDI-TOF/TOF或LC-MS/MS进行质谱分析，利用数据库搜索鉴定蛋白质。

检测仪器设备

等电聚焦仪：提供精确的温度和电压控制，用于第一向蛋白质按等电点分离的核心设备。

IPGphor或Protean i12 IEF系统：自动化程度高的等电聚焦设备，可同时进行多根胶条的电泳。

垂直电泳槽系统：用于第二向SDS-PAGE分离，根据分子量大小分离蛋白质。

多通道灌胶器：用于一次性均匀灌注多块SDS-PAGE凝胶，保证凝胶间的一致性。

恒温循环水浴：在等电聚焦过程中，精确控制IPG胶条的温度，确保分离的重现性。

高速冷冻离心机：用于样品制备过程中细胞碎片、不溶物的去除及蛋白质沉淀。

精密电子天平与pH计：用于精确称量试剂和配制各种缓冲液，保证溶液pH的准确性。

凝胶成像扫描系统：高分辨率、高灵敏度的扫描仪或CCD相机，用于采集染色后的凝胶图像。

图像分析软件：如ImageMaster 2D Platinum、PDQuest等，用于凝胶图像的斑点检测、量化与比对。

自动切胶工作站：可精确定位并切取目标蛋白质点，提高处理通量和准确性，减少污染。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。