凋亡代谢组学质谱分析

检测项目

三羧酸循环中间产物：检测柠檬酸、α-酮戊二酸、琥珀酸等，反映细胞能量代谢的核心状态在凋亡过程中的变化。

氨基酸及其衍生物：定量分析谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸等，揭示蛋白质合成与分解代谢的失衡。

脂质代谢物：包括游离脂肪酸、磷脂酰胆碱、鞘磷脂等，评估细胞膜完整性及脂质信号分子的变化。

核苷酸及其代谢物：检测ATP、ADP、AMP以及嘌呤、嘧啶中间体，反映能量电荷和核酸代谢状态。

活性氧相关代谢物：分析谷胱甘肽（氧化型和还原型）、抗坏血酸等，评估细胞氧化应激水平。

多胺类物质：如腐胺、亚精胺、精胺，其水平变化与细胞增殖和凋亡调控密切相关。

糖酵解中间产物：定量葡萄糖、乳酸、丙酮酸等，阐明凋亡过程中有氧糖酵解（Warburg效应）的转变。

胆碱代谢物：包括胆碱、磷酸胆碱、甘油磷酸胆碱，与细胞膜磷脂代谢和信号转导相关。

肉碱及酰基肉碱：监测脂肪酸β-氧化过程，反映线粒体功能状态。

特定凋亡相关代谢物：如神经酰胺、鞘氨醇-1-磷酸等，作为关键的凋亡脂质信使进行重点分析。

检测范围

内源性小分子代谢物：涵盖分子量通常在1000 Da以下的极性及非极性代谢物。

能量代谢通路：全面覆盖糖酵解、三羧酸循环、氧化磷酸化等核心产能途径。

脂质代谢网络：包括甘油磷脂、鞘脂、脂肪酸等多种脂质类别及其代谢中间体。

氨基酸代谢通路：涉及蛋白质合成、转氨基、脱氨基以及特殊氨基酸代谢途径。

核苷酸代谢途径：涵盖嘌呤和嘧啶的从头合成、补救合成及分解代谢过程。

抗氧化系统组分：包括抗氧化剂分子及其氧化还原对，如GSH/GSSG。

信号转导分子：检测如第二信使、脂质信使等具有生物活性的代谢信号分子。

细胞培养上清液：分析细胞分泌到培养基中的代谢物，反映代谢交换与排泄。

组织提取物：适用于动物或临床组织样本，进行在体水平的凋亡代谢研究。

亚细胞组分：可针对线粒体、细胞质等分离组分进行代谢物定位分析。

检测方法

液相色谱-质谱联用：采用LC-MS/MS，尤其适合极性、热不稳定代谢物的高灵敏度、高选择性分析。

气相色谱-质谱联用：采用GC-MS，适用于挥发性或经衍生化后具有挥发性的代谢物分析。

亲水相互作用色谱：采用HILIC模式，有效分离和检测强极性的亲水性代谢物。

反相色谱：采用C18等色谱柱，广泛应用于中等极性和非极性代谢物（如脂质）的分离。

高分辨质谱：使用Orbitrap或TOF等，提供精确分子量，用于未知代谢物的鉴定和全局代谢组学分析。

三重四极杆质谱：采用MRM扫描模式，对已知目标代谢物进行高灵敏度的绝对定量。

代谢物提取与淬灭：使用冷甲醇/乙腈等方法快速淬灭代谢反应，确保代谢物谱的真实性。

同位素标记示踪：使用13C或15N标记的底物，追踪特定代谢通量的动态变化。

数据依赖采集：采用DDA模式，在MS1全扫后自动选择离子进行MS2碎裂，用于代谢物鉴定。

数据非依赖采集：采用DIA模式（如SWATH），无偏性地获取所有离子的碎裂信息，提高数据覆盖度。

检测仪器设备

超高效液相色谱仪：提供高压、高分离度的色谱分离系统，是LC-MS的核心组成部分。

三重四极杆质谱仪：如AB Sciex的QTRAP系列，是实现靶向代谢物高灵敏度定量分析的主力设备。

高分辨质谱仪：如Thermo的Orbitrap系列或Bruker的TOF系列，用于非靶向代谢组学研究和精确质量数测定。

气相色谱-质谱联用仪：配备电子轰击离子源，用于挥发性代谢物的定性与定量分析。

自动进样器：确保大量样本连续、稳定、精确地进样，提高实验通量和重复性。

柱温箱：精确控制色谱柱温度，保证色谱分离的重现性和稳定性。

氮气发生器/空气压缩机：为质谱仪的离子源和碰撞池提供稳定、洁净的氮气和干燥空气。

真空系统：包括机械泵和分子涡轮泵，为质谱仪的核心离子光学区域提供高真空环境。

数据分析工作站：配备专业软件（如Compound Discoverer, MarkerView, XCMS等），用于原始数据处理、代谢物鉴定和统计分析。

样品制备设备：包括低温离心机、真空浓缩仪、组织匀浆器、分析天平等，用于代谢物的提取、浓缩和预处理。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。