生物发光共振能量转移检测

检测项目

蛋白质-蛋白质相互作用：检测活细胞内或溶液中两种目标蛋白是否发生直接结合，是BRET最经典的应用。

G蛋白偶联受体（GPCR）二聚化：实时监测GPCR家族成员在细胞膜上形成同源或异源二聚体的动态过程。

激酶活性测定：通过检测底物磷酸化导致的构象变化或结合事件，来评估特定激酶的活性水平。

细胞凋亡信号通路检测：监测Caspase等凋亡关键蛋白的激活情况，用于研究细胞凋亡的启动与执行。

小分子药物与靶蛋白结合：通过竞争性实验，评估候选药物分子与目标蛋白的结合能力与效力。

泛素化与去泛素化过程：实时追踪蛋白质的泛素化修饰或去泛素化酶的活性变化。

核受体配体结合：检测类固醇激素等配体与核受体的结合，以及由此引发的共调节因子招募。

第二信使cAMP浓度变化：利用基于EPAC的BRET传感器，实时定量活细胞内cAMP的动态波动。

受体酪氨酸激酶（RTK）激活：监测生长因子刺激下RTK的自磷酸化及下游信号蛋白的招募。

蛋白质构象变化：通过将报告分子插入蛋白内部，检测由配体、pH或离子浓度引起的蛋白构象改变。

检测范围

活细胞实时监测：可在生理条件下，对活细胞内的生物过程进行长时间、非侵入式的动态追踪。

细胞膜信号事件：特别适用于发生在细胞膜表面的受体激活、配体结合及蛋白质相互作用。

细胞质内信号转导：检测细胞质中第二信使浓度变化、蛋白激酶激活及蛋白复合物形成。

细胞核内事件：用于研究转录因子激活、核内受体功能及染色质相关蛋白的相互作用。

细胞器内特定过程：通过定位信号将报告系统靶向线粒体、内质网等细胞器，研究其内部事件。

高通量药物筛选（HTS）：适用于96、384甚至1536孔板格式，用于大规模筛选激酶抑制剂、GPCR配体等。

动物体内成像：结合体内成像系统，可在小动物模型水平监测特定信号通路的活性。

无细胞体系检测：在纯化的蛋白溶液或细胞裂解液体系中，进行精确的生化相互作用分析。

病毒-宿主相互作用研究：用于研究病毒蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用，揭示感染机制。

蛋白质降解动力学：如监测 PROTAC 等分子诱导的靶蛋白降解过程与效率。

检测方法

终点法BRET检测：在特定时间点（如刺激后）一次性测量BRET信号，适用于静态比较。

动力学BRET检测：连续或间隔性读取BRET信号，绘制信号随时间变化的曲线，用于动态过程分析。

比率法BRET：计算受体发射光与供体发射光的比值（BRET比率），有效减少细胞数量、表达差异等变量影响。

BRET饱和实验：固定一种融合蛋白的表达量，递增另一种的量，用于验证相互作用的特异性和测定结合亲和力。

竞争性BRET实验：加入未标记的竞争分子（如野生型蛋白或药物），通过BRET信号降低来评估竞争强度。

微孔板读数器检测：使用具备双发射波长检测功能的酶标仪，进行高通量或多时间点的BRET信号采集。

显微镜成像BRET：结合高灵敏度显微镜，在单细胞水平实现BRET信号的时空分辨率成像。

流式细胞术BRET：利用改装后的流式细胞仪，对大量细胞进行基于BRET的分选或分析。

基于NanoLuc的BRET2：使用NanoLuc荧光素酶与远红光受体配对，获得更高的信噪比和光谱分离度。

三分子BRET：引入第三个发光组分，用于同时检测两种不同的相互作用或更复杂的信号网络。

检测仪器设备

多功能微孔板检测仪：具备双光电倍增管或CCD检测器，可同步读取供体和受体发光信号，是BRET核心设备。

化学发光/荧光酶标仪：配置特定滤光片组（如供体：滤光片1，受体：滤光片2），用于终点法或动力学BRET检测。

活细胞成像系统：配备温控、CO2控制和高灵敏度相机的倒置显微镜，用于单细胞BRET成像。

近红外成像系统：专为检测远红/近红外BRET信号（如BRET2）优化，适用于深部组织或高自发荧光样本。

流式细胞仪（改装）：经过特殊光学配置，能够检测细胞群体的BRET信号，实现基于能量的细胞分选。

光子计数仪：超高灵敏度设备，用于检测极微弱BRET信号或单分子水平的能量转移。

自动液体处理工作站：用于高通量药物筛选时，自动完成细胞接种、化合物添加等步骤，保证实验一致性。

细胞培养与监测系统：整合培养与检测一体，可在长时间内自动维持细胞状态并定时采集BRET数据。

光谱扫描仪：用于在实验初期验证和优化供体发射光谱与受体吸收光谱的重叠情况。

低温恒温器：在进行无细胞体系或生化BRET实验时，用于精确控制反应体系的温度。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。