大麻萜酚醌酸Nrf2活化能力分析

检测项目

细胞活力测定：通过CCK-8或MTT法评估不同浓度CBGA-Q对目标细胞的毒性，确定安全且有效的实验浓度范围。

Nrf2蛋白核转位观察：利用免疫荧光技术，直观检测CBGA-Q处理后细胞内Nrf2蛋白从胞浆向细胞核的转移情况。

核内Nrf2蛋白水平定量：通过Western Blot或ELISA方法，定量分析细胞核提取物中Nrf2蛋白的含量变化。

Keap1蛋白表达水平分析：检测CBGA-Q对Nrf2的负调控因子Keap1在细胞总蛋白中表达量的影响。

ARE报告基因活性测定：构建含有抗氧化反应元件（ARE）的报告基因质粒，转染细胞后检测荧光素酶活性，直接反映Nrf2的转录激活能力。

下游靶基因mRNA表达分析：采用qRT-PCR技术，定量检测NQO1、HO-1、GCLC等经典Nrf2下游抗氧化基因的mRNA表达水平。

下游靶蛋白表达水平分析：通过Western Blot或免疫组化，检测NQO1、HO-1等靶蛋白的表达量上调情况。

细胞内活性氧（ROS）水平检测：使用DCFH-DA等荧光探针，评估CBGA-Q预处理对氧化应激诱导剂引起的ROS累积的清除或抑制能力。

总抗氧化能力（T-AOC）评估：测定经CBGA-Q处理的细胞裂解液的总抗氧化能力，从整体水平评价其抗氧化效应。

细胞凋亡与氧化损伤保护实验：在氧化应激模型中，通过流式细胞术等评估CBGA-Q通过激活Nrf2通路对细胞凋亡的保护作用。

检测范围

人源肝细胞系（如HepG2）：作为代谢和解毒研究的重要模型，评估CBGA-Q在肝脏中的Nrf2活化效果。

人神经母细胞瘤细胞系（如SH-SY5Y）：用于研究CBGA-Q在神经系统中通过Nrf2通路对抗氧化应激的神经保护潜力。

人脐静脉内皮细胞（HUVEC）：评估CBGA-Q在血管内皮细胞中激活Nrf2、缓解血管氧化损伤的作用。

小鼠巨噬细胞系（如RAW264.7）：研究在免疫炎症模型中，CBGA-Q对巨噬细胞Nrf2通路的调节作用。

原代培养的神经元或星形胶质细胞：使用更接近体内状态的细胞，验证CBGA-Q的Nrf2活化能力。

稳定转染ARE报告基因的细胞株：使用报告基因稳转株进行高通量、高灵敏度的Nrf2活化剂筛选和验证。

动物组织样本（肝、脑、肾）：从在体水平，检测经CBGA-Q给药的动物特定组织中Nrf2通路相关指标的变化。

亚细胞组分（胞浆、胞核）：分离细胞的胞浆和胞核组分，分别用于检测Nrf2的分布及核内活性。

不同时间点动态监测：检测CBGA-Q处理后0.5、1、3、6、12、24小时等多个时间点，分析Nrf2活化的动力学特征。

不同浓度梯度效应关系：设置从微摩尔到毫摩尔级别的多个浓度梯度，建立CBGA-Q浓度与Nrf2活化效应的量效关系。

检测方法

CCK-8比色法：利用水溶性四唑盐被线粒体脱氢酶还原生成橙色甲瓒的特性，快速、灵敏地检测细胞增殖与毒性。

免疫荧光染色与共聚焦显微镜成像：使用抗Nrf2特异性抗体进行染色，通过共聚焦显微镜观察其亚细胞定位变化。

Western Blot蛋白质印迹法：通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜后使用特异性抗体检测Nrf2、Keap1、HO-1等目标蛋白的表达量。

双荧光素酶报告基因检测法：共转染ARE报告质粒和内参质粒，通过双荧光素酶检测系统读数，标准化后精确评估转录活性。

实时定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）：提取总RNA并反转录为cDNA，利用SYBR Green或TaqMan探针法定量特定基因mRNA的表达水平。

流式细胞术ROS检测：使用DCFH-DA等荧光探针负载细胞，通过流式细胞仪定量分析细胞内ROS的平均荧光强度。

核质分离提取技术：采用含不同浓度去垢剂的裂解液分步提取胞浆和核蛋白，用于分别分析Nrf2的分布。

T-AOC化学比色法

酶联免疫吸附测定（ELISA）

Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术

检测仪器设备

酶标仪

激光扫描共聚焦显微镜

SDS-PAGE垂直电泳系统及转印装置

化学发光成像系统

实时荧光定量PCR仪

流式细胞仪

超速离心机及低温高速离心机

生物安全柜与CO2恒温培养箱

-80℃超低温冰箱及液氮罐

Nanodrop超微量分光光度计

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。