生物发光共聚焦成像分析

检测项目

报告基因表达活性定量：通过测量萤光素酶等报告基因产生的生物发光信号强度，精确量化特定基因的转录活性。

蛋白质-蛋白质相互作用：利用基于分裂萤光素酶的互补技术，在活细胞内实时检测并定位蛋白质间的相互作用。

细胞信号通路活化监测：构建通路特异性反应元件驱动的报告系统，动态追踪如NF-κB、HIF-1等关键信号通路的激活状态。

肿瘤细胞生长与转移：对表达萤光素酶的肿瘤细胞进行长期、纵向成像，定量评估肿瘤体积变化及转移灶的形成。

干细胞存活与归巢：标记干细胞后植入活体，通过生物发光信号监测其存活、增殖及向靶组织迁移（归巢）的过程。

病原微生物感染动力学：标记细菌或病毒，实时无创地观察其在动物模型体内的感染部位、扩散路径和载量变化。

药物疗效与毒性评估：在疾病模型中，通过治疗前后生物发光信号的对比，客观评价候选药物的治疗效果或器官毒性。

细胞凋亡检测：利用凋亡激活的启动子驱动报告基因表达，实现对细胞凋亡过程的特异性成像。

microRNA活性分析：设计包含microRNA靶序列的报告基因，可视化并定量特定microRNA在细胞或组织中的活性水平。

生物节律研究：使用由节律基因启动子控制的报告系统，长期连续监测细胞或动物模型中生物钟基因的振荡表达模式。

检测范围

体外培养细胞：适用于贴壁或悬浮培养的细胞系、原代细胞，可在多孔板中进行高通量筛选。

三维细胞球体：能够对模拟体内微环境的肿瘤球体或类器官进行深层成像，评估内部细胞的活性。

小动物活体成像：主要应用于小鼠、大鼠等小型实验动物，实现全身或特定器官的无创在体观测。

离体组织与器官：对手术切除的器官或组织切片进行高分辨率成像，精确定位信号来源。

植物生理过程：用于研究植物基因表达、胁迫响应以及植物-微生物互作等生物学事件。

微生物群体感应：研究细菌群体中基于生物发光的化学通信机制及其调控的群体行为。

转基因生物模型：在转基因斑马鱼、果蝇等模式生物中，研究发育相关基因的表达谱式。

病毒感染与复制：追踪病毒在宿主体内的侵染周期、潜伏期激活及传播过程。

免疫细胞追踪：监测过继性输注的T细胞、NK细胞等免疫细胞在体内的分布与肿瘤浸润情况。

代谢活性区域定位：间接反映组织或肿瘤内部代谢活跃的区域，因为ATP是萤光素酶反应的必需底物。

检测方法

底物腹腔注射法：向小动物腹腔注射D-萤光素底物，使其通过血液循环分布至全身，是最常用的在体成像方法。

底物局部灌注法：对于离体器官或组织切片，可采用含有底物的缓冲液进行局部灌注或浸泡，以维持反应。

稳定转化细胞系构建：通过慢病毒转导或质粒转染，将报告基因稳定整合到目标细胞的基因组中。

瞬时转染/转导法：使用质粒或病毒载体将报告系统临时导入细胞，用于快速、短期的功能验证实验。

双报告基因归一化：共转染海肾萤光素酶等第二种报告基因，用于校正转染效率差异和细胞数量变化。

时间动力学曲线绘制：在底物注射后连续采集一系列图像，绘制发光强度随时间变化的曲线，确定峰值时间。

绝对光子数定量: 仪器校准后，将检测到的信号以每秒每平方厘米每球面度的光子数（p/s/cm²/sr）进行绝对定量。

<强>三维断层扫描重建: 结合旋转样品或多视角采集，利用反投影算法重建生物发光信号在体内的三维空间分布。

<强>多模态图像融合: 将生物发光图像与X射线、CT或MRI等解剖结构图像进行叠加融合，精确定位信号源。

<强>低温深麻醉维持: 在整个活体成像过程中，使用气体麻醉机维持动物稳定的深麻醉状态，以消除运动伪影。

检测仪器设备

<强>IVIS系列活体成像系统: 具备高灵敏度CCD相机和密闭暗箱的经典平台，适用于小动物全身及离体样本的高通量成像。

<强>共聚焦型生物发光断层扫描系统: 集成共聚焦扫描原理和光谱分离技术，能实现更高分辨率和更深穿透的三维断层成像。

<强>带制冷背照式CCD相机: 核心检测部件，通过深度制冷（通常至-90°C）极大降低暗电流噪声，捕获极微弱的光子信号。

<强>高精度电动载物台: 用于精确定位样品和多视野自动拼接成像，尤其适用于大样本或高通量筛选。

<强>多谱段滤光轮或光谱仪: 进行光谱分离成像，区分不同颜色（如萤火虫与海肾）的生物发光信号或去除背景自发荧光。

<强>气体麻醉诱导与维持系统: 包含诱导盒和鼻锥，用于在成像过程中安全、稳定地对小动物进行异氟烷等气体麻醉。

<强>恒温加热平台: 在成像过程中维持动物或样品的生理温度（通常37°C），确保酶促反应的最佳活性和动物福利。

<强>图像采集与分析软件: 如Living Image®等专业软件，控制硬件参数、采集图像并进行区域测光、三维重建及数据量化分析。

<强>超低光度显微镜: 将超灵敏相机与倒置显微镜结合，用于单细胞或亚细胞水平的高分辨率生物发光显微成像。

<强>微孔板发光检测模块: 作为多功能读板机的组件之一，用于96/384孔板培养细胞的快速、定量生物发光检测。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。