融合基因凝胶成像系统重排验证

检测项目

DNA质量与浓度评估：对提取的基因组DNA进行纯度和浓度测定，确保样本质量满足后续PCR扩增要求。

目标融合基因引物设计：针对特定的基因断裂点区域，设计并合成高特异性的引物对。

聚合酶链式反应（PCR）扩增：在优化的反应体系下，对目标基因片段进行特异性扩增。

阳性与阴性对照设置：设立已知阳性和无模板阴性对照，以监控实验的特异性和污染情况。

琼脂糖凝胶制备：配制适宜浓度的琼脂糖凝胶，用于分离不同大小的DNA片段。

PCR产物电泳分离：将扩增产物加入凝胶加样孔，在电场作用下按分子量大小进行分离。

核酸染料染色：使用溴化乙锭（EB）或更安全的替代染料对凝胶中的DNA进行染色。

凝胶成像与图像捕获：在特定波长光源激发下，使用成像系统捕获荧光信号，形成电泳条带图像。

条带大小分析与判读：通过分子量标准品对比，判断目的条带大小是否符合预期，确认重排类型。

结果报告与记录：生成包含样本信息、电泳图像、条带分析和结论的正式检测报告。

检测范围

血液系统肿瘤相关融合基因：如BCR-ABL1（慢性髓系白血病）、PML-RARA（急性早幼粒细胞白血病）等。

软组织肉瘤相关融合基因：如EWSR1-FLI1（尤文肉瘤）、SYT-SSX（滑膜肉瘤）等。

淋巴瘤相关基因重排：如IGH基因克隆性重排检测，用于淋巴瘤辅助诊断。

实体瘤相关基因融合：如EML4-ALK（非小细胞肺癌）、TMPRSS2-ERG（前列腺癌）等常见类型。

遗传病相关染色体易位：检测由染色体平衡易位导致的特定融合基因。

药物靶点基因状态确认：验证是否存在可作为靶向治疗依据的特定基因融合事件。

微小残留病（MRD）监测：利用融合基因作为特异性标志物，监测治疗后残留的肿瘤细胞。

细胞系与动物模型验证：在科研中验证构建的转基因细胞或动物模型是否成功导入目标融合基因。

临床诊断辅助与分型：为肿瘤的精确诊断和分子分型提供关键的实验室证据。

科研中新型融合基因的初步筛查：作为高通量测序结果的初步验证手段之一。

检测方法

基因组DNA提取：采用酚-氯仿法或商品化试剂盒从组织或细胞中提取高质量基因组DNA。

引物特异性验证：通过理论分析和实验验证，确保引物仅扩增目标融合序列。

多重PCR技术：可在同一反应体系中加入多对引物，同时检测多个常见的融合位点。

巢式/半巢式PCR：通过两轮扩增提高检测的灵敏度和特异性，尤其适用于低丰度样本。

反转录PCR（RT-PCR）：当检测表达水平的融合转录本时，需先将RNA反转录为cDNA再进行扩增。

琼脂糖凝胶电泳法：利用琼脂糖凝胶的分子筛效应，分离不同长度的DNA扩增产物。

核酸荧光染色法：使用能与DNA双链结合的荧光染料进行染色，便于后续成像观察。

紫外/蓝光透射成像法：将染色后的凝胶置于特定波长光源下，激发荧光并成像记录。

分子量标准比对法：通过与已知大小的DNA Marker条带位置对比，计算目的条带的近似大小。

Sanger测序验证法：将凝胶回收的特异性条带进行测序，是最终确认融合序列的金标准方法。

检测仪器设备

核酸定量仪（分光光度计/荧光计）：用于精确测量DNA样本的浓度和纯度（A260/A280比值）。

聚合酶链式反应仪（PCR仪）：提供精确的温度循环控制，用于目标DNA片段的体外扩增。

<强>电泳电源: 提供稳定的直流电压和电流，驱动DNA片段在凝胶中定向迁移。

<强>水平电泳槽: 盛放琼脂糖凝胶和缓冲液，构成电泳分离的基本装置。

<强>微波炉或加热板: 用于加热溶解琼脂糖粉末以配制凝胶。

<强>凝胶成像系统核心设备: 集成了特定波长光源、高灵敏度CCD或CMOS相机、暗箱和滤光片的专业成像设备。

<强>紫外或蓝光光源发生器: 产生激发核酸染料发出荧光的特定波长光源（如302nm UV或470nm蓝光）。

<强>高性能CCD相机: 捕获微弱的荧光信号并将其转化为数字图像信号，要求高灵敏度和低噪声。

<强>图像分析软件工作站: 运行专业软件，用于控制成像参数、采集图像、分析条带大小和光密度并进行数据管理。

<强>Sanger测序仪: 用于对PCR产物进行直接测序，以最终确认融合基因的精确断裂/连接点序列信息。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。