ELISA验证检测-检测标准-检测项目-北检院

检测项目

ELISA验证主要针对蛋白质类生物标志物的定量或半定量分析。典型检测项目包括细胞因子（如IL-6、TNF-α）、激素（如胰岛素、甲状腺素）、病原体特异性抗体（如HIV抗体、乙肝表面抗原）以及治疗性单克隆抗体浓度测定等。在肿瘤标志物领域可应用于AFP（甲胎蛋白）、CEA（癌胚抗原）的早期筛查；在自身免疫疾病诊断中常用于抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）的检测。对于疫苗研发企业需验证疫苗抗原含量及免疫原性评估；生物制药企业则关注残留宿主细胞蛋白（HCP）和Protein A杂质的痕量检测；食品安全领域可开展过敏原（如花生蛋白）、毒素（如黄曲霉毒素B1）的限量分析。特殊项目如神经退行性疾病相关β淀粉样蛋白（Aβ42）需采用超敏ELISA方案（灵敏度达pg/mL级）。

检测范围

适用样本涵盖血清、血浆、细胞培养上清液、组织裂解液及各类生物制品原液。血清样本需注意溶血/脂血对OD值的影响；细胞培养液需添加蛋白酶抑制剂防止靶蛋白降解；组织样本需标准化均质处理程序。在基质适用性验证中要求回收率控制在80-120%，批内变异系数（CV%）不超过15%。行业应用覆盖临床检验实验室的传染病筛查（如新冠病毒IgG/IgM双抗联检）、CRO机构的药代动力学研究（PK/PD分析）、疾控中心的食源性致病菌监测（如沙门氏菌O抗原）。工业级应用包括生物反应器培养过程监控（如CHO细胞分泌蛋白动态监测）和医疗器械清洗残留验证（如内毒素LAL替代方法）。

检测方法

标准操作遵循双抗体夹心法（Sandwich ELISA）与竞争抑制法两大体系：前者适用于大分子量抗原（>10kDa），需匹配配对抗体的表位结合域；后者用于小分子半抗原检测（如激素），要求酶标抗原与游离抗原具有等同竞争能力。关键参数优化包括包被浓度棋盘滴定（0.5-10μg/mL梯度测试）、封闭剂选择（BSA/casein比较实验）及显色时间动态监控。质量控制环节实施三水平质控品平行测试（低/中/高浓度），建立Levey-Jennings质控图监控批间差异。数据判读采用四参数logistic曲线拟合标准品浓度-OD值关系，要求R²≥0.99方可通过曲线验证。对于灰区结果（cut-off值±20%）需进行重复测定或Western blot确证。