CRISPR验证检测

检测项目

CRISPR验证检测体系包含三大核心模块：

脱靶效应分析：通过全基因组测序(WGS)鉴定非目标位点的DNA修饰事件，采用GUIDE-seq或Digenome-seq技术预测潜在脱靶位点

编辑效率测定：运用数字PCR(ddPCR)定量目标位点的插入/缺失(indel)频率，Sanger测序验证基因型准确性

功能验证实验：包括蛋白质印迹(WB)检测基因敲除效果、荧光报告系统评估Cas9活性、细胞表型分析确认功能改变

系统稳定性测试：涵盖sgRNA二级结构预测、RNP复合物活性保持时间测定及多代细胞传代稳定性跟踪

检测范围

本检测体系适用于以下应用场景：

基础研究领域：基因敲除/敲入细胞系构建验证、转基因动物模型基因型鉴定

农业育种方向：作物基因组定点修饰的遗传稳定性评估

医学治疗应用：基因治疗载体编辑效率验证、CAR-T细胞改造质量监控

工业微生物改造：工程菌株代谢通路重构的精准度检验

诊断试剂开发：CRISPR-Cas系统核酸检测试剂的灵敏度标定

检测方法

高通量测序技术：Illumina NovaSeq 6000平台进行全基因组深度测序(≥30×)，采用CRISPResso2软件进行编辑位点定量分析

数字PCR系统

流式细胞术：BD FACSAria III分选系统结合GFP报告载体评估编辑效率

质谱分析技术：Thermo Q Exactive HF-X进行蛋白质组学验证

显微成像系统：Leica DMi8活细胞工作站动态监测表型变化

生物信息学分析：基于Bowtie2的基因组比对算法和CIRCOS可视化工具构建脱靶图谱

检测仪器

核酸定量设备：Agilent 4200 TapeStation系统进行gRNA完整性检测

基因编辑核心设备：Lonza Nucleofector电转仪实现高效递送体系构建

单细胞分析平台：10x Genomics Chromium系统解析编辑异质性

低温存储系统：Thermo Scientific Forma系列-80℃冰箱保障样本稳定性

数据存储服务器：Dell EMC PowerEdge R750xa支持PB级测序数据存储分析

环境监控装置：Vaisala viewLinc连续监测样本处理区温湿度参数

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。