水仙黄化病毒快速检测

检测项目

病毒粒子形态观察、核酸提取纯度测定、RNA完整性分析、RT-PCR扩增效率验证、引物特异性测试、探针灵敏度校准、ELISA板包被优化、抗体效价测定、电镜负染制备、免疫胶体金试纸条开发、实时荧光定量标准曲线构建、基因序列比对分析、系统进化树构建、病毒载量定量分析、交叉反应性验证、假阳性率控制实验、样本保存稳定性测试、核酸酶污染排查、内参基因选择验证、宿主基因干扰排除、扩增产物测序确认、熔解曲线分析优化、引物二聚体消除实验、模板浓度梯度测试、阳性对照品制备标定、阴性对照体系建立、实验室间比对验证、数据重复性统计分析、方法检出限测定、定量线性范围确认

检测范围

水仙鳞茎组织切片、叶片浸出液样本、根系分泌物提取物、花器离析悬浮液、球茎贮藏组织匀浆液、组培苗新生愈伤组织、种子表面附着物洗脱液、栽培基质浸提液样本、灌溉水过滤浓缩物、昆虫介体唾液腺提取物、机械传播工具擦拭样本、温室空气沉降物采集膜片、包装材料生物残留物样本、进出口检疫截获样品组别A/B/C类标本展示区植株典型病斑取样点筛选样本组别D/E/F类实验室保存毒株复苏样本组别G/H/I类野外疑似感染植株整株取样组别J/K/L类历史阴性对照标本库M/N/O类参考毒株国际交换样本P/Q/R类

检测方法

实时荧光定量RT-PCR法：基于TaqMan探针技术设计特异性引物对病毒RNA进行定量扩增，通过Ct值判定病毒载量。

双抗体夹心ELISA法：采用单克隆抗体包被微孔板捕获病毒衣壳蛋白，酶标二抗显色测定吸光度值。

免疫电镜技术：胶体金标记抗体与病毒粒子特异性结合后通过透射电镜观察定位抗原表位。

核酸斑点杂交法：将待测RNA固定于尼龙膜后与地高辛标记探针杂交显色判定阳性信号。

环介导等温扩增技术：利用BstDNA聚合酶在恒温条件下实现靶序列高效扩增，通过浊度变化判读结果。

数字PCR绝对定量法：通过微滴分割技术实现单分子扩增的绝对定量分析。

纳米孔测序技术：基于OxfordNanopore平台进行全长基因组实时测序分析。

免疫层析试纸条法：胶体金标记抗体在硝酸纤维素膜上形成可见检测线实现现场快速筛查。

检测标准

GB/T36851-2018植物病毒检疫鉴定方法通则

SN/T2123-2020进出境种球花卉病毒检测规程

ISO16140-3:2021分子生物学方法验证国际标准

EPPOPM7/98(2)水仙黄化病毒诊断协议

GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

NY/T401-2000脱毒种苗病毒检测技术规范

ISO/IEC17025:2017检测实验室能力通用要求

GB/T27405-2008实验室质量控制规范分子生物学检验

AOACOfficialMethod2005.08PlantVirusImmunoassay

ASPVD-TP-01-2022亚太植物病毒诊断技术规程

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：ABIQuantStudio系列设备支持TaqMan探针与SYBRGreen双模式运行。

全自动核酸提取工作站：KingFisherFlex系统实现96通道同步完成磁珠法RNA纯化。

酶标分析仪：BioTekSynergyH1具备双光路系统支持ELISA数据精准读取。

冷冻切片机：LeicaCM1950提供-25℃低温环境保障植物组织超薄切片完整性。

超速离心机：BeckmanOptimaXPN-100实现病毒粒子梯度密度离心富集。

纳米孔测序仪：OxfordNanoporeGridION平台支持长读长实时测序分析。

生物分子互作分析系统：BiacoreT200通过表面等离子共振技术测定抗体亲和力常数。

全自动电泳系统：Agilent4200TapeStation完成RNA质量完整性指数(RIN)评估。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。